重組人干擾素-α2b分離純化的研究.pdf

1、干擾素是由不同細(xì)胞產(chǎn)生的可溶性糖蛋白,具有抗病毒、抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)功能。Ⅰ型干擾素中的干擾素-α因具有很強(qiáng)的抗病毒活性而被用于治療慢性乙肝和丙肝感染。干擾素治療中最大的缺點(diǎn)是具有極短的半衰期,這就降低了干擾素的藥效和生物利用性。目前,提高干擾素半衰期的方法是采用聚乙二醇對(duì)干擾素-α2進(jìn)行蛋白修飾。
　　由Bolder Biotechnology,nc生物技術(shù)公司構(gòu)建的含有干擾素-α基因的質(zhì)粒轉(zhuǎn)化進(jìn)大腸桿菌W3110,IPTG誘導(dǎo)后

2、經(jīng)SDS-PAGE分析,表達(dá)產(chǎn)物的分子量為19KDa左右,并且蛋白以不溶性的包涵體形式存在。
　　利用超聲破碎對(duì)菌體細(xì)胞進(jìn)行破碎可以提取包涵體,使用6mol/L鹽酸胍對(duì)包涵體進(jìn)行溶解變性,變性蛋白緩緩注入復(fù)性溶液稀釋20倍,4℃靜置48h后即可復(fù)性。
　　采用疏水相互作用層析分離重組人干擾素-α2b,去除干擾素樣品中的二聚體,得到高純度的干擾素用于進(jìn)一步的研究。首先采用陽(yáng)離子交換層析純化復(fù)性重組人干擾素-α2b,去除了大部分

3、的雜蛋白,然后采用疏水相互作用層析純化重組人干擾素-α2b,去除復(fù)性過程中產(chǎn)生的錯(cuò)誤折疊體和二聚體,并考察鹽濃度、pH值、流速和洗脫液中尿素對(duì)疏水相互作用層析純化效果的影響。最終確定硫酸銨初始濃度1.2mol/L、緩沖液pH值6.0、流速2.5mL/min、洗脫液中添加尿素濃度為2mol/L時(shí)疏水相互作用層析純化效果最佳。最終得到的重組人干擾素-α2b非還原型SDS-PAGE電泳均呈單一條帶。本文確定了疏水層析純化重組人干擾素-α2b的