重組人干擾素-α2b位點特異性的PEG化修飾.pdf

1、重組干擾素-α是一種具有抗病毒、免疫調(diào)節(jié)、抑制細胞增殖等生物活性的細胞因子,臨床上用于治療病毒性疾病和癌癥。由于干擾素在體內(nèi)的循環(huán)半衰期短,因此為維持有效的血藥濃度需要每天或一周三次對病人進行給藥。聚乙二醇化學修飾可以有效的改善干擾素的物理化學性質(zhì)和生物學特性,延長體內(nèi)循環(huán)半衰期。本文中制備的重組人干擾素-α2b是利用基因重組技術在蛋白質(zhì)的氨基酸序列中引入了游離的半胱氨酸,隨后應用馬來酰亞胺PEG修飾劑對引入的游離巰基進行位點特異性修飾

2、,從而得到了結(jié)構單一的單PEG化干擾素蛋白。
　　重組人干擾素-α2b在大腸桿菌中以不溶性包涵體的形式表達。實驗對比優(yōu)化了包涵體蛋白的洗滌和體外變性、復性的條件,以提高蛋白產(chǎn)率和純度。同時,對重組人干擾素-α2b的PEG化修飾反應條件進行了優(yōu)化,分別對還原劑、反應體系pH、反應溫度、反應時間、蛋白濃度等條件進行了優(yōu)化。通過這些反應條件的優(yōu)化,提高單PEG化重組人干擾素-α2b蛋白的產(chǎn)率。
　　目前,用于分離純化PEG化蛋白的