KLF12、AIRE、AFF1、AFF3及ETS-1基因多態(tài)性與中國(guó)人群類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎遺傳易感性的關(guān)聯(lián)研究.pdf

1、研究背景:
　　類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（rheumatoid arthritis,RA）是一種以累及周圍關(guān)節(jié)為主的系統(tǒng)性自身免疫病。臨床表現(xiàn)為受累關(guān)節(jié)腫痛，該病若不經(jīng)及時(shí)、規(guī)范治療，病情會(huì)進(jìn)行性發(fā)展而導(dǎo)致關(guān)節(jié)軟骨與骨質(zhì)破壞，進(jìn)而造成關(guān)節(jié)畸形與功能喪失，嚴(yán)重地影響患者生活質(zhì)量。RA的發(fā)病涉及多種因素，大量研究表明遺傳因素在RA的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用，該病的遺傳度高達(dá)60％左右。近年來(lái)，從人類基因組水平探索基因單核苷酸多態(tài)性（single-n

2、ucleotide polymorphism，SNP）位點(diǎn)與疾病遺傳易感性之間聯(lián)系的全基因組關(guān)聯(lián)研究（genome-wide association study，GWAS）極大地豐富了我們對(duì)復(fù)雜疾病遺傳易感因素的認(rèn)識(shí)。迄今，已有多項(xiàng)GWAS發(fā)現(xiàn)并證實(shí)了幾十個(gè)與 RA遺傳易感性相關(guān)的遺傳易感區(qū)域/位點(diǎn)，但這些GWAS大多數(shù)是在歐美人群中開展的，尚未見(jiàn)我國(guó)RA的GWAS結(jié)果報(bào)道。
　　一項(xiàng)在西班牙人群中開展的GWAS發(fā)現(xiàn)KLF12基因

3、rs1324913位點(diǎn)與RA遺傳易感性相關(guān)，此前，在英國(guó)人群中開展的 GWAS發(fā)現(xiàn) KLF12基因 rs1887346位點(diǎn)與RA遺傳易感性相關(guān)，表明KLF12是RA的遺傳易感基因。一項(xiàng)在日本人群中開展的GWAS發(fā)現(xiàn)AIRE基因的兩個(gè)SNP位點(diǎn)（rs2075876和rs760426）與RA的遺傳易感性相關(guān)，并且rs2075876位點(diǎn)與AIRE基因的轉(zhuǎn)錄水平相關(guān)。
　　系統(tǒng)性紅斑狼瘡（systemic lupus erythemato

4、sus，SLE）與RA同屬系統(tǒng)性自身免疫病，由于RA與SLE臨床表型相似、家族聚集，表明RA與SLE可能存在共同的遺傳背景，大量疾病間的遺傳易感性驗(yàn)證研究也證實(shí)了RA與SLE確實(shí)具備相同的遺傳易感因素。一項(xiàng)在日本人群中開展的GWAS和多階段驗(yàn)證研究發(fā)現(xiàn)AFF1 rs340630與SLE遺傳易感性相關(guān)且該位點(diǎn)風(fēng)險(xiǎn)等位基因A與AFF1基因轉(zhuǎn)錄水平上調(diào)相關(guān)。此前，與AFF1基因同屬一個(gè)基因家族的AFF3基因啟動(dòng)子區(qū)域的rs10865035位點(diǎn)

5、被報(bào)道與RA遺傳易感性相關(guān)，隨后一些研究也發(fā)現(xiàn)AFF3基因與 RA遺傳易感性相關(guān)。一項(xiàng)在中國(guó)漢族人群開展的GWAS發(fā)現(xiàn)ETS-1 rs6590330位點(diǎn)與SLE遺傳易感性相關(guān)，另一項(xiàng)在亞洲人群中開展的GWAS發(fā)現(xiàn)ETS-1 rs1128334位點(diǎn)與SLE遺傳易感性相關(guān)，該位點(diǎn)與rs6590330位點(diǎn)高度連鎖且位于3’-非翻譯區(qū)（untranslated region，UTR），其風(fēng)險(xiǎn)等位基因A與正常人外周血單個(gè)核細(xì)胞（periphera

6、l blood mononuclear cell，PBMC）中ETS1基因的轉(zhuǎn)錄水平下調(diào)有關(guān)，表明ETS-1 rs1128334位點(diǎn)是一個(gè)功能性SNP位點(diǎn)。
　　目的:
　　鑒于種族間的遺傳異質(zhì)性、RA與SLE具備共同的遺傳易感因素，且尚未見(jiàn)國(guó)內(nèi)有研究報(bào)道 KLF12 rs1324913、KLF12 rs1887346、AIRE rs2075876、AIRE rs760426、AFF1 rs340630、AFF3 rs108

7、65035及ETS-1 rs1128334位點(diǎn)與中國(guó)人群RA遺傳易感性之間的關(guān)系，故本研究擬采用病例對(duì)照研究，通過(guò)檢測(cè)RA患者與對(duì)照中上述SNP位點(diǎn)，分析各SNP位點(diǎn)基因型頻率分布與等位基因頻率分布在RA病例組與對(duì)照組間的差異，并進(jìn)一步分析各位點(diǎn)風(fēng)險(xiǎn)等位基因在不同遺傳模型（顯性遺傳模型與隱性遺傳模型）下與RA遺傳易感性之間的關(guān)系，以期為我國(guó)人群RA遺傳易感性研究提供本底資料，并為進(jìn)一步開展相關(guān)分子致病機(jī)制研究提供科學(xué)依據(jù)。
　　方

8、法:
　　本課題采用病例對(duì)照研究設(shè)計(jì)，RA病例為安徽省六安市人民醫(yī)院風(fēng)濕免疫科的門診RA患者，所有病例均符合美國(guó)風(fēng)濕病協(xié)會(huì)（American College of Rheumatology，ACR）1987年修訂的RA分類標(biāo)準(zhǔn)。對(duì)照為六安市人民醫(yī)院骨科門診因外傷就診者。研究對(duì)象知情同意后，按照性別與年齡信息的一般人口學(xué)特征，收集RA患者的資料，同時(shí)抽取外周靜脈血5ml，提取研究對(duì)象基因組DNA。運(yùn)用專業(yè)SNaPshot SNP技術(shù)

9、檢測(cè)基因多態(tài)位點(diǎn)。采用Excel2003軟件錄入資料。運(yùn)用STATA12.0軟件評(píng)估對(duì)照組中各SNP位點(diǎn)的基因型頻率分布是否符合哈迪-溫伯格平衡（Hardy-Weinberg equilibrium，HWE）。使用SPSS11.0軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)、卡方檢驗(yàn)和logistic回歸分析。關(guān)聯(lián)強(qiáng)度以比值比（odds ratio，OR）及其95%置信區(qū)間（confidence interval，CI）表示。以α=0.05為一類檢驗(yàn)水準(zhǔn)，采用Bon

10、ferroni法在多重比較時(shí)對(duì)檢驗(yàn)水準(zhǔn)進(jìn)行矯正，因本次研究共有7個(gè)SNP位點(diǎn)，所以矯正后的檢驗(yàn)水準(zhǔn)為0.05/7=7.14×10-3。
　　結(jié)果:
　?。?）研究對(duì)象一般情況：本研究共納入RA患者232例，對(duì)照313例。RA患者中男性45例，女性187例，年齡最小者14歲，最大者80歲，平均年齡為（48.69±14.18）歲。RA患者中RF陽(yáng)性154例，RF陰性78例；CCP陽(yáng)性228例，CCP陰性4例。對(duì)照組中男性197例

11、，女性116例，年齡最小者2歲，最大者91歲，平均年齡為（47.02±16.34）歲。RA病例組與對(duì)照組的性別構(gòu)成有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（χ2=102.33，P<0.01），而平均年齡無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（t=1.28，P=0.20）；
　?。?）HWE檢驗(yàn)：7個(gè)基因多態(tài)性位點(diǎn)在對(duì)照組中的基因型頻率分布均符合HWE（KLF12 rs1324913位點(diǎn)：?2=0.34，P=0.56；KLF12 rs1887346位點(diǎn)：?2=2.67，P=0.10；A

12、IRE rs2075876位點(diǎn)：?2=0.11，P=0.74；AIRE rs760426位點(diǎn)：?2=0.02，P=0.89；AFF1 rs340630位點(diǎn)：?2=4.20，P=0.04；AFF3 rs10865035位點(diǎn)：?2=4.76，P=0.03；EST-1 rs1128334位點(diǎn)：?2=2.26×10-3，P=0.95）；
　?。?）各基因多態(tài)性位點(diǎn)與RA遺傳易感性之間的關(guān)聯(lián)研究結(jié)果：考慮到RA病例組與對(duì)照組間性別構(gòu)成存在統(tǒng)

13、計(jì)學(xué)差異，我們?cè)诜治鯮A病例組與對(duì)照組間的基因型頻率分布差異、風(fēng)險(xiǎn)等位基因在不同遺傳模型（隱性遺傳模型與顯性遺傳模型）下與RA遺傳易感性的關(guān)聯(lián)情況時(shí)在性別上進(jìn)行了矯正，研究結(jié)果顯示AIRE rs2075876位點(diǎn)的基因型頻率分布（χ2=8.22，P=0.02）與等位基因頻率分布（A vs. G：χ2=5.30，P=0.02，OR=1.33，95%CI1.04-1.69）在RA病例組與對(duì)照組間均存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，且該位點(diǎn)風(fēng)險(xiǎn)等位基因在顯性遺

14、傳模型下與RA遺傳易感性之間存在統(tǒng)計(jì)學(xué)關(guān)聯(lián)（A/A+G/A vs. G/G：χ2=7.24，P=7.15×10-3，OR=1.78，95% CI1.17-2.70）；AIRE rs760426位點(diǎn)的基因型頻率分布在RA病例組與對(duì)照組間存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(χ2=6.46，P=0.04)，且該位點(diǎn)風(fēng)險(xiǎn)等位基因G在隱性遺傳模型下與RA遺傳易感性之間存在統(tǒng)計(jì)學(xué)關(guān)聯(lián)（G/G vs. G/A+A/A：χ2=5.38，P=0.02，OR=1.73，95%

15、 CI1.09-2.76）。然而，經(jīng)Bofferroni法矯正后僅有AIRE rs2075876位點(diǎn)A等位基因在顯性遺傳模型下與RA遺傳易感性之間的關(guān)聯(lián)結(jié)果經(jīng)Bonferroni法矯正后邊緣顯著。未發(fā)現(xiàn)其余5個(gè)基因多態(tài)性位點(diǎn)與RA遺傳易感性相關(guān)。
　　結(jié)論:
　　本研究發(fā)現(xiàn)AIRE rs2075876位點(diǎn)、AIRE rs760426位點(diǎn)與我國(guó)人群RA遺傳易感性相關(guān)，但經(jīng)Bofferroni法矯正后僅有AIRE rs20758

16、76位點(diǎn)A等位基因在顯性遺傳模型下與RA遺傳易感性之間的關(guān)聯(lián)結(jié)果經(jīng)Bonferroni法矯正后邊緣顯著。AIRE基因可能是我國(guó)人群RA的一個(gè)遺傳易感基因，將來(lái)有必要采用大樣本研究來(lái)證實(shí)AIRE是否確實(shí)是我國(guó)人群RA的遺傳易感基因。本研究尚未發(fā)現(xiàn)KLF12 rs1324913、KLF12 rs1887346、AFF1 rs340630、AFF3 rs10865035及ETS-1 rs1128334位點(diǎn)與我國(guó)人群RA遺傳易感性相關(guān)，這些基因