促紅細(xì)胞生成素在蛛網(wǎng)膜下腔出血后的保護(hù)作用.pdf

1、背景和目的： 動(dòng)脈瘤性蛛網(wǎng)膜下腔出血(subarachnoid hemorrhage，SAH)后的病理生理機(jī)制復(fù)雜，蛛網(wǎng)膜下腔的血液及血液分解產(chǎn)物的毒性作用、氧自由基產(chǎn)生、炎癥反應(yīng)、NO途徑及血管內(nèi)皮凋亡等途徑參與腦血管痙攣(cerebrovascularvasospasm，CVS)的發(fā)生和發(fā)展，上述病理生理變化多數(shù)又是造成腦損傷的原因。臨床上，藥物治療主要集中在預(yù)防和緩解腦血管痙攣和腦保護(hù)兩方面。近年來，促紅細(xì)胞生成素(ery

2、thropoietin，EPO)的腦保護(hù)作用已經(jīng)得到廣泛的研究。在體內(nèi)或體外的多種動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?包括缺血模型、壓迫和挫傷模型、紅藻氨酸誘發(fā)的癲癇模型、多發(fā)性硬化模型及高血糖等模型)中都證實(shí)EPO對(duì)不同的致傷因子均具有腦保護(hù)作用。并提出了多種機(jī)制解釋EPO對(duì)神經(jīng)的保護(hù)作用，包括抑制活性氧家族和興奮性氨基酸——谷氨酸的產(chǎn)生，刺激血管再生，調(diào)節(jié)突觸轉(zhuǎn)運(yùn)，抑制凋亡，調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)及神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)作用等。最近的研究中發(fā)現(xiàn)EPO除了腦保護(hù)作用外，對(duì)SAH后

3、的CVS也有明顯的緩解作用。EPO在SAH后緩解CVS和腦保護(hù)作用目前處于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究階段，對(duì)于EPO緩解CVS的機(jī)制并不明確，而且有關(guān)利用EPO能否減輕SAH后CVS和減少神經(jīng)元死亡起到腦保護(hù)作用的研究，相關(guān)報(bào)道甚少，國(guó)內(nèi)未見報(bào)道。本研究試圖在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中驗(yàn)證EPO是否具有緩解SAH后CVS以及腦保護(hù)的作用，并通過分析血管內(nèi)皮的凋亡情況和血管痙攣程度的關(guān)系推斷EPO保護(hù)血管內(nèi)皮是否可能是其緩解CVS的機(jī)制之一。 材料和方法：

4、 30只雄性新西蘭白兔，體重2.8-3.3 kg，隨機(jī)平均分為5組：空白組、陰性對(duì)照組(枕大池注入生理鹽水)、SAH組、SAH+安慰劑組和SAH+HuEPO組。采用枕大池一次注血(非抗凝自體動(dòng)脈血2m1)的方法建立SAH模型。模型建立后48小時(shí)，取腦脊液后采用活體灌注法將動(dòng)物處死。留取基底動(dòng)脈標(biāo)本及顳葉皮層組織。用原位細(xì)胞凋亡檢測(cè)法(TUNEL)分別檢測(cè)基底動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞、顳葉皮層神經(jīng)元凋亡情況，并通過測(cè)定基底動(dòng)脈血管橫截面積來判斷有

5、無腦血管痙攣。用酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法測(cè)定腦脊液中S-100B蛋白含量。 結(jié)果：空白組和陰性對(duì)照組之間，SAH組和SAH+安慰劑組之間各項(xiàng)指標(biāo)檢測(cè)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異?；讋?dòng)脈橫截面積測(cè)定的結(jié)果提示SAH組及SMH+安慰劑組較空白組和陰性對(duì)照組明顯縮小(P<0.01)，而SAH+HuEPO組較SMH組及SAH+安慰劑組明顯增大(P<0.01)；TUNEL染色顯示SAH+rHuEPO組基底動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞、顳葉皮層神經(jīng)元凋亡程度較SAH

6、組及SMH+安慰劑組明顯減輕(P<0.05)；而SAH+rHuEPP組腦脊液S-100B蛋白含量較SAH組和SAH+安慰劑組明顯減少(P<0.05)?；讋?dòng)脈橫截面積、內(nèi)皮細(xì)胞凋亡率、神經(jīng)元凋亡率和腦脊液S100B蛋白含量這四項(xiàng)指標(biāo)兩兩之間均具有良好的相關(guān)性，其中基底動(dòng)脈橫截面積和內(nèi)皮細(xì)胞凋亡率，神經(jīng)元凋亡率和腦脊液S100B蛋白含量之間相關(guān)系數(shù)最高。 結(jié)論：早期使用 rHuEPO能減少兔枕大池注血模型基底動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞的凋亡并減