納米顆粒擴(kuò)增金標(biāo)試紙條的研究與應(yīng)用.pdf

1、分子水平的生物學(xué)定量檢測(cè)需要更先進(jìn)的生物分析方法。近年來在醫(yī)學(xué)、動(dòng)物檢驗(yàn)、食品衛(wèi)生檢驗(yàn)等研究領(lǐng)域中，快速、靈敏、準(zhǔn)確的分析方法在檢測(cè)細(xì)菌、病毒和農(nóng)獸藥殘留上得到了很廣的發(fā)展應(yīng)用。膠體金免疫層析是一種簡(jiǎn)單、快速的免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)，利用金標(biāo)抗體與抗原的特異反應(yīng)進(jìn)行檢測(cè)。這種方法也廣泛地應(yīng)用在禽畜類疾病的監(jiān)測(cè)診斷中，例如對(duì)禽流感病毒、新城疫病毒及牛病毒性腹瀉病毒的診斷。膠體金技術(shù)比熒光免疫，放射性免疫及酶聯(lián)免疫法的檢測(cè)靈敏度低，如果可以使金顆粒

2、擴(kuò)增，就能實(shí)現(xiàn)肉眼可見檢測(cè)，提高靈敏度。
　　 本研究基于膠體金免疫層析法原理，并探索形成了納米顆粒擴(kuò)增膠體金免疫層析試紙條制備的技術(shù)體系。利用增敏輔助試劑的化學(xué)反應(yīng)使固定在硝酸纖維素膜上的膠體金抗體抗原反應(yīng)復(fù)合物的顆粒原位增長(zhǎng)，讓膠體金原位所形成的納米顆粒染色，使金標(biāo)信號(hào)顯著增強(qiáng)，提高了檢測(cè)靈敏度。
　　 首先利用金顆粒對(duì)蛋白質(zhì)分子吸附的功能，將一種單克隆抗體與膠體金顆粒結(jié)合制備免疫檢測(cè)探針，然后在硝酸纖維素膜上，噴上

3、包被抗體作為檢測(cè)線(T線)和羊抗鼠抗體作為質(zhì)控線(C線)。將被檢樣品加到樣品墊上，樣品會(huì)沿NC膜流向吸水墊，樣品中檢測(cè)物濃度大于檢出限時(shí)，金標(biāo)抗體抗原結(jié)合物與固定在T線上的抗體結(jié)合，T線顯色，呈陽性；樣品中檢測(cè)物濃度小于檢出限時(shí)，T線不顯色，結(jié)果為陰性。在增敏步驟中，將一定濃度的氯金酸和抗壞血酸或鹽酸羥胺按一定比例混勻(參考專利：200810106529.6)，滴加NC膜上進(jìn)行金顆粒擴(kuò)大，檢測(cè)倍數(shù)可提高10～100倍。同時(shí)，利用紫外可見