麻疹病毒核酸等溫擴(kuò)增試紙條快速檢測技術(shù)的研究與應(yīng)用.pdf

1、麻疹是由麻疹病毒引起的以發(fā)熱、出疹為特征的急性呼吸道傳染病，該病傳染性強(qiáng)，致死率高，是目前導(dǎo)致發(fā)展中國家兒童死亡的重要原因。20世紀(jì)60年代以來，麻疹疫苗開始廣泛使用，使麻疹的發(fā)病率、死亡率大幅度降低，但據(jù)世界衛(wèi)生組織（World Health Organization，WHO）統(tǒng)計，全球每年仍有超過2千萬麻疹病例。WHO制定的全球控制與消除麻疹計劃中，麻疹的實(shí)驗(yàn)室檢測是麻疹監(jiān)測的重要組成部分。
　　本研究將逆轉(zhuǎn)錄環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增技

2、術(shù)（Reverse-transcriptase loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP）與帶防污染裝置的橫向流動試紙條檢測技術(shù)（lateral flow dipstick,LFD）相結(jié)合，建立了一種麻疹病毒核酸快速檢測的新方法。研究針對麻疹病毒血凝素基因設(shè)計6條RT-LAMP擴(kuò)增引物與1條特異性檢測探針，其中上游內(nèi)引物與探針的5’端分別標(biāo)記生物素（biotin）與異硫氰酸熒光素（Fl

3、uorescein isothiocyanate,FITC），進(jìn)行帶biotin標(biāo)記的RT-LAMP反應(yīng),同時進(jìn)行與FITC-探針的雜交，最后利用LFD對等溫擴(kuò)增產(chǎn)物完成可視化核酸試紙條檢測。通過對檢測體系的優(yōu)化，建立的麻疹病毒RT-LAMP-LFD快速檢測技術(shù)能在1h內(nèi)完成對樣本的檢測（包括核酸提?。椒z測敏感性與熒光RT-PCR方法相同，達(dá)到10個RNA copies/μL，同時與其他常見呼吸道傳染病病毒無交叉反應(yīng)，具有良好的檢