甜瓜細(xì)菌性葉枯病膠體金免疫試紙條的研發(fā)與應(yīng)用.pdf

1、甜瓜細(xì)菌性葉枯病由丁香假單胞菌黃瓜致病變種（Pseudomonas syringae pv.lachrymans）引起，在世界范圍內(nèi)均會(huì)發(fā)生，造成不同程度的損失，近年來(lái)在中國(guó)逐漸發(fā)展嚴(yán)重，對(duì)果實(shí)產(chǎn)量帶來(lái)嚴(yán)重?fù)p失。
　　瓜類細(xì)菌性果斑病(bacterial fruit blotch)的病原菌被確認(rèn)為西瓜噬酸菌（Acidovorax citrulli），是一種危害西瓜和甜瓜的世界檢疫性種傳病害。丁香假單胞菌和西瓜噬酸菌（Acidovo

2、rax citrulli）在西瓜和甜瓜上有著很相似的發(fā)病癥狀，我們用肉眼和傳統(tǒng)的檢驗(yàn)檢疫方法是很難將兩者區(qū)分開(kāi)的。所以建立高效，快捷，操作簡(jiǎn)單的檢測(cè)技術(shù)區(qū)分這兩種病害是防止甜瓜細(xì)菌性葉枯病病原菌傳播的有效手段。
　　本研究采用腹腔免疫方式免疫小鼠，通過(guò)細(xì)胞融合技術(shù)獲得雜交瘤細(xì)胞株，成功制備單克隆抗體。采用雙抗體夾心模式，使用兩個(gè)不同特異性的單克隆抗體，制備免疫層析試紙條。一種抗甜瓜細(xì)菌性葉枯病菌的單抗(b)被固定在硝酸纖維素膜檢測(cè)

3、區(qū)域，而另一種抗甜瓜細(xì)菌性葉枯病菌單抗(c)偶聯(lián)到作為顯色劑的膠體金粒子上。然后將植物樣品溶液通過(guò)毛細(xì)管作用，與抗甜瓜細(xì)菌性葉枯病菌的抗體在檢測(cè)區(qū)發(fā)生反應(yīng)，使甜瓜細(xì)菌性葉枯病菌滯留在檢測(cè)區(qū)域，從而出現(xiàn)紅色結(jié)果。在定性檢測(cè)中，本試紙條對(duì)甜瓜細(xì)菌性葉枯病菌的定性檢測(cè)限為2.5×103cfu/mL，與細(xì)菌性果斑病菌不存在交叉反應(yīng)，具有很強(qiáng)的特異性。在半定量檢測(cè)中，甜瓜細(xì)菌性葉枯病菌在2.5×103cfu/mL～105cfu/mL濃度范圍內(nèi)，T