基于層析試紙條和納米顆粒對(duì)破傷風(fēng)抗體進(jìn)行測(cè)定的研究.pdf

1、破傷風(fēng)是由高致病性的破傷風(fēng)桿菌所釋放的毒素造成的，由于破傷風(fēng)外毒素直接破壞人體的神經(jīng)肌肉組織，故而發(fā)病后癥狀都比較嚴(yán)重，同時(shí)死亡率也比較高。因此，快速、準(zhǔn)確地監(jiān)測(cè)人體血清中的破傷風(fēng)抗體水平，對(duì)于破傷風(fēng)的預(yù)防和治療起著重要的指導(dǎo)作用。免疫層析試紙條技術(shù)應(yīng)用于破傷風(fēng)抗體的檢測(cè)，具有簡(jiǎn)便快速、樣品需求量少、對(duì)實(shí)驗(yàn)設(shè)備要求低、可用于床邊診斷等優(yōu)勢(shì)，在臨床分析和醫(yī)學(xué)診斷等領(lǐng)域有很好的發(fā)展前景。
　　本文針對(duì)破傷風(fēng)抗體的測(cè)定，發(fā)展了兩種檢測(cè)方

2、法，一種是基于雙抗原夾心法原理的膠體金試紙條，另一種是基于量子點(diǎn)的熒光試紙條。具體開(kāi)展的工作如下：
　　1、膠體金免疫層析試紙條用于破傷風(fēng)抗體的檢測(cè)。
　　首先使用檸檬酸鈉還原氯金酸的方法，制備了直徑為40 nm的膠體金顆粒，用目測(cè)法、紫外吸收法對(duì)所制備的納米金進(jìn)行了評(píng)價(jià)。然后，將膠體金作為標(biāo)記探針，通過(guò)靜電吸附作用標(biāo)記上破傷風(fēng)原抗原（人源）。分別將破傷風(fēng)原抗原和破傷風(fēng)抗體固定在硝酸纖維素膜上作為檢測(cè)線和質(zhì)控線，采用雙抗原夾

3、心法原理構(gòu)建了破傷風(fēng)抗體膠體金快速檢測(cè)試紙條。本方法對(duì)破傷風(fēng)抗體的檢測(cè)限為0.01 IU/mL，特異性良好。試紙條在4℃密封保存6個(gè)月，檢測(cè)效果幾乎不變。對(duì)10個(gè)血清樣品進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果與酶聯(lián)免疫（ELISA）方法一致。
　　2、Cu:Zn-In-S/ZnS量子點(diǎn)免疫層析試紙條用于破傷風(fēng)抗體的檢測(cè)。
　　首先制備了油溶性的Cu:Zn-In-S/ZnS量子點(diǎn)，通過(guò)巰基十一酸進(jìn)行配體交換，得到水溶性的量子點(diǎn)，并對(duì)其進(jìn)行了紅外、

4、紫外、熒光光譜的表征以及光穩(wěn)定性考察。接下來(lái)使用純化后的水溶性Cu:Zn-In-S/ZnS量子點(diǎn)通過(guò)化學(xué)鍵合反應(yīng)標(biāo)記上羊抗人IgG(Fc)，建立了基于量子點(diǎn)的熒光免疫層析試紙條，檢測(cè)線和質(zhì)控線分別為破傷風(fēng)原抗原和人IgG，通過(guò)抗原抗體免疫反應(yīng)在檢測(cè)線上形成抗原-抗體-二抗-量子點(diǎn)的復(fù)合物結(jié)構(gòu)，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)破傷風(fēng)抗體的檢測(cè)。對(duì)該方法進(jìn)行了靈敏度、特異性、穩(wěn)定性考察，試紙條的檢測(cè)限為0.001 IU/mL，比膠體金試紙條的靈敏度提高了10倍。