左卡尼汀胃腸道給藥對(duì)2型糖尿病小鼠治療作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:復(fù)制高脂高糖鏈脲佐菌素(STZ)誘導(dǎo)的2型糖尿病小鼠模型,建立2型糖尿病模型小鼠血漿和肝臟組織中卡尼汀群柱前衍生化熒光高效液相色譜檢測(cè)方法,從坐骨神經(jīng)和肝臟的角度篩選并確定左卡尼汀灌胃給藥對(duì)2型糖尿病小鼠治療作用的有效劑量及作用機(jī)制。
　　 方法:①?gòu)?fù)制2型糖尿病小鼠模型:3周齡高脂高糖喂養(yǎng)的雄性昆明種小鼠分別于6周齡、9周齡時(shí)兩次腹腔注射STZ(100mg/Kg),24h后非空腹血糖(NFBG)高于12.0mmol/L,

2、者為2型糖尿病模型。②實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì):雄性昆明種小鼠分為對(duì)照組、2型糖尿病模型組、卡尼汀給藥組(250 mg/Kg、125mg/Kg、62.5mg/Kg,1次/天,po.),每周測(cè)量非空腹血糖(NFBG),4周后酶法測(cè)定血漿和肝臟組織勻漿中TG含量,肝臟、脂肪稱重,計(jì)算肝指數(shù)(肝臟與體重比值),肉眼及光鏡下觀察肝臟脂肪變性程度,電鏡觀察坐骨神經(jīng)、肝臟超微結(jié)構(gòu),ELASA法測(cè)量血漿胰島素、IGF-1含量、坐骨神經(jīng)勻漿IGF-1含量、肝臟組織勻漿

3、。FFA含量。將小鼠尾部末端浸入溫度為49±0.5℃的水中,記錄連續(xù)灌胃8周各組小鼠甩尾潛伏期,及成模4周后連續(xù)中劑量卡尼汀給藥4周小鼠甩尾潛伏期。③HPLC-FL法檢測(cè)各組小鼠血漿和肝臟組織中卡尼汀群含量。樣本經(jīng)蛋白沉淀處理后,用1-氨基葸(1-AA)將樣本熒光衍生化,熒光高效液相色譜方法測(cè)定,血漿和肝臟組織勻漿中左卡尼汀(LC)、乙酰左卡尼汀(ALC)、丙酰左卡尼汀(PLC)含量。采用SPSS17.0軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。

4、　　 結(jié)果:①高脂高糖喂養(yǎng)聯(lián)合兩次腹腔注射低劑量STZ誘導(dǎo)正常小鼠成為2型糖尿病動(dòng)物模型,第2次注射STZ24h后血糖高于12.0mmol/L為復(fù)制模型成功。②2型糖尿病小鼠肝指數(shù)高于對(duì)照小鼠(p＜0.01),血漿、肝臟內(nèi)TG水平顯著高于對(duì)照小鼠(p＜0.01),肝臟FFA水平高于對(duì)照小鼠(p＜0.05),肝臟可見(jiàn)明顯脂肪病變,超微結(jié)構(gòu)肝臟線粒體腫脹、粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張,坐骨神經(jīng)髓鞘結(jié)構(gòu)模糊、髓鞘板層分離、軸突萎縮,血漿胰島素、IGF-1

5、、坐骨神經(jīng)勻漿IGF-1水平與對(duì)照小鼠無(wú)明顯差異(p＞0.05)。經(jīng)250 mg/Kg、125mg/Kg LC治療后,小鼠肝指數(shù)下降(p＜0.01,p＜0.05),血漿、肝臟內(nèi)TG水平下降(p＜0.01,p＜0.05),血漿胰島素水平顯著升高(p＜0.01):肝臟線粒體形態(tài)基本正常,粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)清晰,脂肪滴減少;坐骨神經(jīng)髓鞘結(jié)構(gòu)較完整,少量纖維髓鞘板層結(jié)構(gòu)疏松,軸突形態(tài)飽滿。2型糖尿病小鼠的甩尾潛伏期在成模3-6周時(shí)低于對(duì)照組小鼠(p＜0

6、.05),LC(250 mg/Kg、125mg/Kg)劑量組甩尾潛伏期在整個(gè)過(guò)程中均無(wú)變化,與模型組相比其3-6周的甩尾潛伏期明顯延長(zhǎng)(p＜0.05);LC(62.5 mg/Kg)治療組在成模4周時(shí)甩尾潛伏期短于正常小鼠(p＜0.05),但與模型組小鼠相比程度明顯較輕(p＜0.05)。延遲給藥組在成模2-4周時(shí),甩尾潛伏期明顯低于對(duì)照組(p＜0.05),經(jīng)LC(125mg/Kg)治療1周后,與模型組相比甩尾潛伏期延長(zhǎng)(p＜0.05),L

7、C治療2周時(shí),甩尾潛伏期與對(duì)照組差異無(wú)顯著性,長(zhǎng)于模型組(p＜0.05)。③熒光高效液相色譜法可同時(shí)檢測(cè)2型糖尿病小鼠血漿和組織勻漿中LC、ALC和PLC的含量,其中PLC含量低于樣品的線性范圍。2型糖尿病小鼠血漿中LC、ALC的含量、肝臟中的LC含量均明顯降低(p＜0.05),口服LC后小鼠血漿中的LC、ALC明顯升高(p＜0.01,p＜0.05)。
　　 結(jié)論:成功復(fù)制2型糖尿病小鼠模型。建立2型糖尿病模型小鼠血漿和肝臟組織