多囊卵巢綜合征患者顆粒細胞bFGF和CFTR表達及與IVF-ET結局關系的研究.pdf

1、目的:
　　 多囊卵巢綜合征(polycystic ovarian syndrome,PCOS)是青春期及育齡期婦女最常見的內(nèi)分泌紊亂疾病,其主要特征為高雄激素血癥與排卵障礙,發(fā)病率約為5％-10％,占不排卵婦女的75％,多毛婦女可高達85％以上。1935年Stein和Leventhal首次報道,故又稱為Stein-Leventhal綜合征。其臨床表現(xiàn)為月經(jīng)失調、肥胖、男性化表現(xiàn)、不孕及雙側卵巢呈多囊性增大等。因其高度異質性的臨

2、床癥候群,其病理生理學差異也較大,涉及遺傳方面、糖代謝、神經(jīng)內(nèi)分泌方面、蛋白質代謝、脂代謝、下丘腦.垂體.卵巢軸調節(jié)功能紊亂以及卵巢局部調節(jié)因子等的異常變化。因其病因至今尚不十分清楚,發(fā)病機制非常復雜,因而至今仍是生殖內(nèi)分泌領域研究的熱點之一。近年來,卵巢微壞境的變化成為研究重點,某些卵巢局部調節(jié)因子的功能紊亂成為PCOS發(fā)病的重要環(huán)節(jié)。堿性成纖維細胞生長因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)和囊

3、性纖維化跨膜轉導調節(jié)因子(cystic fibrosis transmembrane conductance regulator,CFTR)是兩種重要的卵巢局部調節(jié)因子。
　　 bFGF是一個含146氨基酸序列的多肽類生長因子,具有廣泛的生物學功能。在生殖方面,參與卵泡的生長和發(fā)育,排卵及胚胎發(fā)育等。CFTR是一種含氯離子的跨膜蛋白,具有廣泛的生物學活性。在生殖方面,對女性內(nèi)分泌,精子獲能及胚胎著床方面有重要的作用。其中,bFG

4、F的研究主要集中在正常人、動物和PCOS動物模型的卵巢組織中,CFTR的研究以子宮內(nèi)膜、輸卵管和卵巢過度刺激為主,對于兩因子在PCOS患者卵巢組織及顆粒細胞中的表達國內(nèi)外均未見報道。本研究通過在COH(controlled ovarian hyperstimulation)周期的黃素化顆粒細胞上bFGF和CFTR是否有表達及表達規(guī)律；探討bFGF和CFTR在PCOS發(fā)病機制中的作用。
　　 材料與方法:
　　 選取201

5、0年7月-2011年2月在鄭州大學第一附屬醫(yī)院生殖中心病房行IVF-ET助孕治療的患者共70例。將其分兩組:第一組為PCOS組30名(試驗組),第二組為非PCOS組40名(對照組)。促排卵方案為我中心常規(guī)標準長方案:GnRHa降調節(jié)后促卵泡刺激素(果納芬,rFSH)超促排卵,卵泡發(fā)育成熟后注射HCG,36-37小時行陰道B超檢測下取卵,卵母細胞體外培養(yǎng)后受精(短時體外培養(yǎng)4小時),2-3天后行胚胎移植,14天、18天分別化驗血、尿HCG

6、,5周后腹部彩超檢查宮內(nèi)有孕囊證實臨床妊娠。收集月經(jīng)第2-3天、促超排卵劇期的注射HCG日晨7:00外周靜脈血(空腹)4ml。收集取卵日第一管卵泡直徑>15mm以上的、清亮、無血染的卵泡液,簡稱FF。收集的靜脈血和卵泡液均2000轉／分鐘離心,離心10分鐘,吸取上清裝入無菌Eppendorf管中,保存于-80℃待測。采用全自動電化學發(fā)光儀測定血清和卵泡液中FSH、LH、E2和P水平。分離取卵日卵泡液中所有的顆粒細胞,采用免疫組化法和RT

7、-PCR法檢測顆粒細胞bFGF和CFTR蛋白及mRNA表達。
　　 結果:
　　 1.試驗組和對照組黃素化顆粒細胞上均有bFGF蛋白及mRNA表達,且PCOS組bFGF表達量高于對照組,差異具有顯著性(P<0.05)。
　　 2.在COH周期,顆粒細胞bFGFmRNA表達水平與卵泡液中E2有相關性(r=0.643,P<0.05)。
　　 3.在COH周期,顆粒細胞bFGFmRNA表達水平與WF-ET結局無

8、相關性(P>0.05)。
　　 4.試驗組和對照組黃素化顆粒細胞上有CFTR蛋白及mRNA表達,且PCOS組bFGF表達量高于對照組,差異具有顯著性(P<0.05)。
　　 5.在COH周期,顆粒細胞CFTRmRNA表達水平與卵泡液中P、E2有相關性(r=-0.672,P<0.05；r=0.457,P<0.05)。
　　 6.在COH周期,顆粒細胞CFTRmRNA表達水平與IVF-ET結局無相關性(P>0.05)

9、。
　　 結論:
　　 1.bFGF在PCOS患者COH周期黃素化顆粒細胞呈高表達,可能與PCOS發(fā)病機制有關。
　　 2.在COH周期,顆粒細胞bFGFmRNA表達水平與卵泡液中E2有相關性,與IVF-ET結局無相關性。
　　 3.CFTR在PCOS患者COH周期黃素化顆粒細胞呈高表達,可能與PCOS發(fā)病機制有關。
　　 4.在COH周期,顆粒細胞CFTRmRNA表達水平與卵泡液中E2、P有相關