拉米夫定與原兒茶酸藥物組合體外抗HBV作用機制研究.pdf

1、乙型肝炎病毒(hepatitisBvirus，HBV)感染是世界性難題，不僅會造成急、慢性肝炎，而且與肝硬化和肝癌的發(fā)生密切相關(guān)。全世界約有3.5億HBV慢性感染者，每年死于肝癌的約為32萬。我國現(xiàn)有乙型肝炎患者約為1200萬。
　　 目前用于抗HBV治療的抗病毒藥物中單一藥物治療乙肝根本不能達(dá)到患者的理想狀態(tài)，參考治療艾滋病的經(jīng)驗，人們推測合理的聯(lián)合藥物治療可以提高藥物療效，由于拉米夫定的諸多優(yōu)點，大多數(shù)聯(lián)合治療試驗均將其納入

2、，加之中醫(yī)藥在治療中恢復(fù)肝功能、防止肝纖維化、調(diào)整免疫機能等方面都有一定的優(yōu)勢，拉米夫定聯(lián)合中藥治療慢性乙型肝炎的思路已經(jīng)成為新的研究方向。通過我們前期的研究結(jié)果，已經(jīng)篩選出具有抗病毒功效的藥物組合--拉米夫定聯(lián)合原兒茶酸。
　　 研究HBV的常用肝癌細(xì)胞系包括HepG2、Huh6、Huh7等，這些細(xì)胞系都具有絕大部分肝細(xì)胞特異的功能，能分泌主要的血漿蛋白。HepG2.2.15細(xì)胞是來源于HepG2細(xì)胞，整合了ayw型HBV全基

3、因組，能夠部分模擬HBV的生活周期，表達(dá)各種HBV產(chǎn)物并能分泌HBVDane顆粒的穩(wěn)定的人類肝癌細(xì)胞株，更接近于人體肝細(xì)胞內(nèi)環(huán)境的實際情況，被研究者廣泛應(yīng)用于HBV復(fù)制的研究。
　　 本文研究了拉米夫定與原兒茶酸藥物組合抑制乙肝病毒(HBV)復(fù)制的分子生物學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)機理。Huh7細(xì)胞轉(zhuǎn)染五種不同的HBV基因啟動子質(zhì)粒后，分別與藥物作用一定時間，測定各組熒光值，分析藥物對HBV五種基因啟動子的調(diào)控作用。Huh7細(xì)胞轉(zhuǎn)染外源性G

4、FP-HBx融合質(zhì)粒后，分別與藥物作用一定時間，利用共聚焦熒光顯微鏡觀察藥物對外源性HBVX蛋白在細(xì)胞內(nèi)分布的影響。HepG2.2.15細(xì)胞與藥物作用一定時間后，用Westernblot分析藥物對內(nèi)源性HBVX蛋白在細(xì)胞核內(nèi)含量的影響。
　　 結(jié)果顯示不同濃度拉米夫定、原兒茶酸及其藥物組合對HBV啟動子(含兩個增強子)有不同程度的抑制作用，且聯(lián)合用藥效果最好。拉米夫定及其與原兒茶酸的藥物組合對HBVX蛋白的入核有抑制作用，且聯(lián)合