丹參酮ⅡA多劑型的體內(nèi)篩選和體外代謝研究.pdf

1、目的: 本研究旨在通過(guò)建立LC-MS/MS方法對(duì)丹參中的一個(gè)單體成分——丹參酮ⅡA——采用制劑新技術(shù)獲得的多個(gè)劑型進(jìn)行生物利用度比較研究，期望獲得高生物利用度的新劑型，并對(duì)其進(jìn)行體外代謝研究，對(duì)代謝產(chǎn)物進(jìn)行結(jié)構(gòu)解析，期望獲得活性代謝產(chǎn)物，預(yù)測(cè)藥物相互作用，提高臨床用藥的安全性。 方法: （1）建立LC-MS/MS方法，采用4*4交叉試驗(yàn)設(shè)計(jì)，減少實(shí)驗(yàn)誤差，采用比格犬作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，分別對(duì)粉末、口服液、膠囊、注射劑等

2、劑型進(jìn)行生物利用度比較研究。（2）用SD大鼠混合肝微粒體P450單一酶對(duì)丹參酮ⅡA進(jìn)行了代謝穩(wěn)定性研究，采用96孔板進(jìn)行反應(yīng)和孵育、叔丁基甲醚萃取和96孔板離心的樣品處理方法、LC-MS/MS檢測(cè)等手段，得到了丹參酮ⅡA新劑型在體外被肝微粒體代謝的消除半衰期、清除率等信息。（3）采用NADPH、FMO抑制劑、P450各亞型抑制劑等方法，采用乙腈沉淀蛋白的樣品處理方法進(jìn)行了代謝表型研究（4）采用平衡透析的方法，對(duì)丹參酮37℃進(jìn)行孵育18h

3、后，利用LC-MS液質(zhì)聯(lián)用儀進(jìn)行了血漿蛋白結(jié)合率的研究（5）采用LC-MSn離子阱技術(shù)，對(duì)丹參酮ⅡA的多級(jí)質(zhì)譜進(jìn)行研究，對(duì)其結(jié)構(gòu)斷裂途徑進(jìn)行推測(cè)，利用SD大鼠肝微粒體孵育方式，對(duì)丹參酮ⅡA在體外的生物轉(zhuǎn)化進(jìn)行了研究。（6）實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分別采用統(tǒng)計(jì)矩法、DAS、3P97、winnonlon軟件對(duì)比進(jìn)行了藥代參數(shù)的計(jì)算，最終采用統(tǒng)計(jì)矩法分析，統(tǒng)計(jì)分析采用SAS8．2統(tǒng)計(jì)軟件。 結(jié)果: 四次給藥后，超微粉懸液組、口服液組、丹參酮膠

4、囊組（4mg·kg－1）的藥物生物利用度F依次為5．4±0．61%，7．3±0．87%，5．6±1．5%，經(jīng)過(guò)統(tǒng)計(jì)分析，兩兩之間沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但口服液組的的生物利用度要高于其他兩組；代謝穩(wěn)定性：t1/2體外代謝穩(wěn)定，與其在比格犬血漿中的半衰期較長(zhǎng)一致，清除率相關(guān)性較好；代謝表型研究發(fā)現(xiàn)有TS代謝途徑主要有CYP3A2、CYP2E1、CYP2C11、CYP2D1幾種方式；TS血漿蛋白結(jié)合率均較高，大予95%。且該藥的結(jié)合率與藥物濃度無(wú)關(guān)