微泡在乳腺癌耐藥信息傳遞及與化療療效判斷中的價(jià)值.pdf

1、目的：探討微泡在乳腺癌細(xì)胞間耐藥信息的傳遞及其攜帶耐藥相關(guān)蛋白MRP1、BCRP水平與化療療效判斷中的價(jià)值。
　　方法：⑴選用乳腺癌細(xì)胞MCF-7/WT與耐多柔比星細(xì)胞MCF-7/ADM為模型，運(yùn)用MTT法檢測(cè)兩株細(xì)胞對(duì)藥物多柔比星的IC50，激光共聚焦顯微鏡觀察多柔比星在兩株細(xì)胞內(nèi)的分布，透射電子顯微鏡觀察兩株細(xì)胞亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)-微泡及檢測(cè)微泡內(nèi)藥物;⑵收集MCF-7/ADM細(xì)胞來源的微泡為研究材料，運(yùn)用共聚焦顯微鏡觀察該類微泡與M

2、CF/WT細(xì)胞相互作用過程;運(yùn)用MTT法檢測(cè)微泡與野生細(xì)胞共培養(yǎng)后IC50變化;運(yùn)用RT-PCR、流式細(xì)胞方法分別檢測(cè)兩株細(xì)胞MRP1、BCRPmRNA與蛋白水平，兩株細(xì)胞來源的微泡攜帶MRP1、BCRPmRNA與蛋白水平，以及MCF-7/ADM細(xì)胞微泡與MCF-7/WT細(xì)胞共培養(yǎng)后MRP1、BCRPmRNA與蛋白水平。⑶收集43例新輔助化療后乳腺癌患者外周血及癌組織，運(yùn)用RT-PCR、流式細(xì)胞方法檢測(cè)外周血微泡MRP1mRNA、BCR

3、PmRNA與蛋白水平，免疫熒光檢測(cè)外周血微泡MUC1陽性率及MUC1與MRP1、BCRP共表達(dá)率，運(yùn)用熒光原位雜交技術(shù)、免疫組化技術(shù)檢測(cè)癌組織MRP1mRNA、BCRPmRNA與蛋白水平;采用RT-PCR檢測(cè)84例晚期轉(zhuǎn)移性乳腺癌姑息化療患者外周血微泡MRP1、BCRP mRNA水平，并按中位值分為高表達(dá)組和低表達(dá)組，分析MRP1 mRNA、BCRP mRNA水平與PFS的相關(guān)性。
　　結(jié)果：①乳腺癌MCF-7/ADM細(xì)胞IC50

4、為21.29μmol/L，比MCF-7/WT細(xì)胞IC50的0.053μmol/L高400倍左右;多柔比星在MCF-7/WT細(xì)胞主要聚集在細(xì)胞核，在MCF-7/ADM細(xì)胞主要被微泡包裹并遷移至細(xì)胞膜外側(cè)出芽;透射電子顯微鏡顯示在MCF-7/ADM細(xì)胞表面存在大量微泡，而在MCF-7/WT細(xì)胞很少有微泡結(jié)構(gòu);分離的MCF-7/ADM細(xì)胞來源的微泡內(nèi)存在大量多柔比星。②微泡與MCF-7/WT細(xì)胞體外共培養(yǎng)呈現(xiàn)出隨著時(shí)間與數(shù)量的增加而增加;共培

5、養(yǎng)后細(xì)胞IC50為0.954μmol/L，升高了18倍左右;MCF-7/ADM細(xì)胞MRP1、BCRP mRNA相對(duì)水平分別為0.63±0.04、0.45±0.08，較MCF-7/WT細(xì)胞的0.26±0.07、0.21±0.05高，p＜0.05; MCF-7/ADM細(xì)胞MRP1、BCRP蛋白相對(duì)熒光強(qiáng)度分別為13.5±2.1、12.7±1.9較MCF-7/WT的6.5±1.2、7.2±1.4高，p＜0.05; MCF-7/ADM細(xì)胞微泡M

6、RP1、BCRP mRNA相對(duì)水平分別為0.63±0.09、0.67±0.06，較MCF-7/WT細(xì)胞的0.14±0.07、0.37±0.08高，p＜0.05;MCF-7/ADM來源微泡表面MRP1、BCRP、Flotillin-2、MUC1蛋白相對(duì)熒光值分別為9.99±1.58、10.1±1.6、12.5±2.39、10.2±1.76較MCF-7/WT細(xì)胞來源微泡的7.10±2.13、4.3±2.1、5.24±1.49、4.17±1.

7、62高，p＜0.05; MCF-7/ADM細(xì)胞來源的微泡與MCF-7/WT細(xì)胞共培養(yǎng)后，MRP1、BCRP mRNA水平升高，p＜0.05;共培養(yǎng)細(xì)胞MRP1、BCRP蛋白熒光強(qiáng)度分別為8.5±1.1、9.2±1.0較MCF-7/WT細(xì)胞高，p＜0.05。③按RECIST標(biāo)準(zhǔn)評(píng)價(jià)化療療效并分CR/PR組與SD/PD組，SD/PD組患者外周血微泡MUC1陽性率、MUC1-MRP1共表達(dá)率以及MUC1-BCRP共表達(dá)率分別是11.67±0.

8、76％、24.35±3.52％、20.08±3.38％，均較CR/PR組的6.67±1.03％、1.74±0.75％、1.82±0.65％高，p＜0.05;外周血微泡內(nèi)攜帶MRP1、BCRP mRNA水平，在SD/PD組分別為0.58±0.07、0.61±0.08較CR/PR組的0.07±0.01、0.11±0.03高，p＜0.01;癌組織檢測(cè)MRP1、BCRP（mRNA與蛋白）同樣發(fā)現(xiàn)在SD/PD組較CR/PR組高;MRP1 mRNA

9、與BCRP mRNA高表達(dá)組的PFS分別為3.00、2.80月較低表達(dá)組的4.66、4.00月短;Cox多因素分析示MRP1、BCRP mRNA水平是晚期轉(zhuǎn)移性乳腺癌姑息化療的獨(dú)立預(yù)后因素。
　　結(jié)論：乳腺癌微泡能夠包裹藥物外排保護(hù)腫瘤細(xì)胞免受化療藥物的殺傷;耐藥細(xì)胞微泡能夠攜帶MRP1、BCRP并傳遞給敏感細(xì)胞使其獲得一定得耐藥性;乳腺癌患者外周血微泡MRP1、BCRP與癌組織具有一致性，并與近期化療療效相關(guān);微泡MRP1、BC