冬蟲夏草無性型的鑒定和生長特性研究.pdf

1、冬蟲夏草是我國一種傳統(tǒng)的名貴中藥，具有極其重要的藥用價值。近年來由于天然冬蟲夏草被過度采集，已經(jīng)瀕臨滅絕危險。供不應求的矛盾促使人們尋找天然蟲草的替代物，冬蟲夏草無性型的分離和培養(yǎng)是有效途徑之一。 為此，本實驗首先對冬蟲夏草分離株進行了分子鑒定，全面研究其培養(yǎng)特征，測定其有效成分，這些研究為冬蟲夏草無性型未來的商業(yè)化開發(fā)奠定了基礎，為人工培養(yǎng)蟲草菌絲體代替天然冬蟲夏草提供依據(jù)。 采用PCR及DNA測序的方法，對所保藏的冬蟲

2、夏草分離株rDNA ITS全序列進行分析，該分離株和數(shù)據(jù)庫中AB067721(Hirsutella sinensis，日本)完全相同，與AJ309359(Hirsutella sinensis，貴州大學)相比在544位多一個G，在83位C與AJ488274(Hirsutella sinensis，臺灣)的A相區(qū)別，以上結(jié)果表明分離株為冬蟲夏草的真正無性型-中國被毛孢。同時和蛹蟲草rDNA ITS序列進行比較，相似性僅有76％，顯然屬于不

3、同的種。 對中國被毛孢的固體培養(yǎng)基進行優(yōu)化，發(fā)現(xiàn)在改良PDA上生長速度最快；研究其對溫度的適應性，18℃為最適溫度，25℃以上不能生長，并首次以圖片說明菌株的這個特征；首次運用環(huán)境掃描電鏡觀察菌絲的顯微結(jié)構(gòu)，清晰顯示了分生孢子的大小、形狀和著生方式。詳細報道的中國被毛孢菌落特征為以后的無性型分離和鑒定提供可靠依據(jù)。 本實驗探討了大量元素、微量元素和氨基酸對中國被毛孢生長的影響，確定 MgSO4·7H2O、FeCl3·6H

4、2O、賴氨酸、蛋氨酸能夠促進生長，其中Fe3+為主要影響因素；另外，對該菌株的液體培養(yǎng)基進行優(yōu)化，發(fā)現(xiàn)40天后改良PDB和PPDB中菌絲量最高，達到7.84-8.34g/L。且培養(yǎng)液顏色（棕褐色或黑色）越深，生長越旺盛。這部分所積累的固、液培養(yǎng)數(shù)據(jù)是中國被毛孢進一步培養(yǎng)工藝研究的基礎。 用反相高效液相色譜法測定中國被毛孢固體培養(yǎng)菌絲體腺苷和蟲草素含量，用苯酚-硫酸法測定蟲草多糖含量。結(jié)果表明，采用的乙腈-水梯度洗脫方法能將中國被