金標(biāo)免疫滲濾法檢測類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎自身抗體的研究.pdf

1、膠體金標(biāo)記技術(shù)的建立催生了兩種經(jīng)典的免疫學(xué)檢測方法，斑點(diǎn)金免疫滲濾(DIGFA)和膠體金免疫層析技術(shù)(GICA)，其中DIGFA由于具有快速、結(jié)果可直接判讀、可單人份檢測、結(jié)果穩(wěn)定等優(yōu)點(diǎn)逐漸成為開發(fā)各類快速診斷試劑的技術(shù)基礎(chǔ)，一系列針對臨床、食品等多個領(lǐng)域的DIGFA被建立和應(yīng)用。類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)是一種自身免疫性疾病，晚期關(guān)節(jié)多發(fā)生畸形難以治愈，早期診斷對疾病的控制尤為重要，大量研究已經(jīng)表明在臨床癥狀出現(xiàn)好幾年前患者血清中就會出現(xiàn)

2、特異的自身抗體，對這些自身抗體的檢測對RA的早期診斷非常有利。
　　本文擬建立檢測RA兩種自身抗體的DIGFA，旨在簡化檢測操作、降低檢測成本、在樣本量少的情況下可快速開展檢測。為此，首先通過與歐蒙試劑盒對比及檢測臨床確定的血清對待檢抗體特異的抗原進(jìn)行了篩選制備，采用鏈酶親和素-生物素結(jié)合方式將環(huán)瓜氨酸肽(CCP)與載體蛋白進(jìn)行偶聯(lián)，優(yōu)化了新的含18個氨基酸的環(huán)肽序列;確定了較穩(wěn)定的類風(fēng)濕因子(RF)特異抗原的原料來源，同時優(yōu)化了

3、特異性高的HRP標(biāo)記F(ab')2片段作為酶標(biāo)二抗，并比較了兔IgG、人IgG、Fc片段幾種常用于RF檢測的抗原性能。
　　接著，本文制備了抗自身抗體的膠體金探針，對各反應(yīng)參數(shù)進(jìn)行了優(yōu)化，確定了較好的偶聯(lián)pH在8.2～8.5之間(7μL K2CO3(5％)/mLAu)，最小偶聯(lián)蛋白量為22μg/mLAu，最適大分子穩(wěn)定劑是BSA（免疫級）和PEG-20K，較優(yōu)洗滌純化緩沖液是Tris-HCl(pH8.2)，最后優(yōu)化了探針凍干的最佳