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1、氧化/抗氧化失衡在肺纖維化發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮著重要的作用。γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-glutamylcysteine synthetase,γ-GCS)是谷胱甘肽(glutathione,GSH)合成反應(yīng)的限速酶,認(rèn)為是非常重要的抗氧化酶;體外細(xì)胞學(xué)培養(yǎng)研究認(rèn)為紅系衍生核因子相關(guān)因子-2(NF-E2 related factor2,Nrf2)可以調(diào)控抗氧化酶的表達(dá)。
本實(shí)驗(yàn)室前期動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究表明苦參堿具有抗炎、抗纖維化作用,但
2、其調(diào)控Nrf2表達(dá)的具體機(jī)制不明。
目的:本研究探討苦參堿通過(guò)調(diào)控Nrf2對(duì)人胚肺成纖維細(xì)胞γ-GCS表達(dá)的影響,為尋找有效的抗肺纖維化藥物提供臨床治療的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
方法:體外培養(yǎng)的人胚肺成纖維細(xì)胞MRC-5至指數(shù)生長(zhǎng)期,分為空白對(duì)照組、苦參堿組、苦參堿+SiRNA干預(yù)組。空白對(duì)照組為A組:細(xì)胞使用MEM/NEAA培養(yǎng)基加10%FBS(Hyclone)培養(yǎng);苦參堿組:正常培養(yǎng)的人胚肺成纖維細(xì)胞加入苦參堿;苦參堿+Si
3、RNA干預(yù)組:正常培養(yǎng)的人胚肺成纖維細(xì)胞加入苦參堿并加入SiRNA沉默Nrf2 mRNA。根據(jù)苦參堿濃度進(jìn)行亞分組:苦參堿組中0.25mmol/L Mat為B組、0.5 mmol/LMat為C組、1.0 mmol/LMat為D組;苦參堿+SiRNA干預(yù)組中0.25mmol/L Mat為E組、0.5 mmol/LMat為F組、1.0 mmol/LMat為G組。以上各組細(xì)胞,經(jīng)苦參堿處理1、2、4、8小時(shí)后,細(xì)胞Nrf2、γ-GCSmRNA
4、表達(dá)水平使用RT-PCR檢測(cè),細(xì)胞Nrf2、γ-GCS蛋白表達(dá)水平使用Western blot檢測(cè)。
結(jié)果:
?。?)人胚肺成纖維細(xì)胞中γ-GCSmRNA、Nrf2mRNA表達(dá):A組低于 B、C、D組(P<0.05);表達(dá)隨Mat濃度增大呈上升趨勢(shì),以4h較高,第8h較低,但仍高于空白組(P<0.05)。
?。?)人胚肺成纖維細(xì)胞中γ-GCS蛋白、Nrf2蛋白表達(dá):A組低于 B、C、D組(P<0.05);表達(dá)隨
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