色氨酰tRNA合成酶表達(dá)對(duì)BALB-c小鼠淋巴瘤動(dòng)物模型細(xì)胞增殖的影響.pdf

1、目的：淋巴瘤是起源于淋巴結(jié)和結(jié)外淋巴組織的免疫系統(tǒng)惡性腫瘤，其中，非霍奇金淋巴瘤(NHL)的發(fā)病率和死亡率逐年上升。近年來(lái)，細(xì)胞免疫功能失衡或免疫耐受作為惡性腫瘤的發(fā)病機(jī)制之一逐漸成為共識(shí)。最新的研究顯示，色氨酸是唯一與細(xì)胞免疫功能紊亂相關(guān)的氨基酸，其中，吲哚胺2，3雙加氧酶(IDO)通過(guò)催化色氨酸沿犬鳥氨酸途徑降解，減低細(xì)胞微環(huán)境中的色氨酸水平而發(fā)揮對(duì)細(xì)胞增殖的抑制作用[1-5]。另一種色氨酸代謝酶--色氨酰tRNA合成酶(TTS)增

2、加細(xì)胞內(nèi)色氨酰-tRNA儲(chǔ)備，對(duì)抗IDO介導(dǎo)的色氨酸消耗，維持細(xì)胞的活化增殖狀態(tài)。之前的研究已證實(shí)，在非霍奇金淋巴瘤的腫瘤細(xì)胞中存在IDO的表達(dá)，并與預(yù)后密切相關(guān)。本實(shí)驗(yàn)主要通過(guò)BALB/e小鼠皮下注射A20細(xì)胞建立淋巴瘤動(dòng)物模型，IDO抑制劑1-MT瘤旁、瘤內(nèi)注射，免疫組化及western blot檢測(cè)組織水平TTS的表達(dá)情況，及IDO抑制劑對(duì)TTS表達(dá)水平的影響，進(jìn)一步探討色氨酸代謝紊亂與淋巴瘤細(xì)胞增殖的關(guān)系，為臨床免疫干預(yù)治療提供

3、新的思路。
　　 方法1.建立淋巴瘤動(dòng)物模型：4-8周BALB/c小鼠飼養(yǎng)與無(wú)病原條件下。隨機(jī)分為三組后，將生長(zhǎng)狀態(tài)良好的A20細(xì)胞注射于小鼠的右腋背部皮下，約5×106/只，每周三次觀察腫瘤生長(zhǎng)，并與注射后20天處死小鼠，取其腫瘤組織、淋巴結(jié)及脾臟。
　　 2.采用兔抗小鼠TTS多克隆抗體和免疫組化SP法檢測(cè)各組腫瘤組織、淋巴結(jié)組織TTS表達(dá)。
　　 3.Western blot半定量分析腫瘤組織、淋巴結(jié)組織T

4、TS表達(dá)差異。
　　 4.所有數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析均使用統(tǒng)計(jì)軟件包SPSS17.0處理。多組均數(shù)間的比較采用單因素方差分析，多個(gè)樣本均數(shù)間的兩兩比較采用LSD檢驗(yàn)，P<0.05表明差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果1.A20細(xì)胞接種后7d于小鼠右腋背部皮下可觸及腫瘤形成，直徑約0.3-0.5cm，成瘤率95％以上。處死時(shí)(接種后20d)腫瘤生長(zhǎng)最大直徑約3-4cm。大體解剖可見腫瘤呈圓形或橢圓形，瘤體表面呈結(jié)節(jié)或分葉狀，無(wú)完整的結(jié)

5、締組織包膜，向鄰近皮膚、胸壁等組織浸潤(rùn)，右腋下轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)常增大并融合。光學(xué)顯微鏡下觀察：腫瘤組織中瘤細(xì)胞大小較一致，彌漫分布，核大而深染，胞漿量較多；腫瘤轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)正常結(jié)構(gòu)破壞，可見灶狀浸潤(rùn)的腫瘤細(xì)胞團(tuán)。
　　 2.TTS胞漿表達(dá)，腫瘤轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)內(nèi)可見體積較大的腫瘤細(xì)胞呈灶性浸潤(rùn)，TTS陽(yáng)性細(xì)胞主要集中于浸潤(rùn)區(qū)。腫瘤組織中可見陽(yáng)性細(xì)胞彌漫分布，胞漿量豐富，染色為棕黃色或黃褐色。與正常淋巴結(jié)相比，腫瘤組織及腫瘤轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)TTS表達(dá)

6、均升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　 3.正常小鼠淋巴結(jié)組織中存在少量TTS表達(dá)，與正常對(duì)照相比，腫瘤組及治療組小鼠腫瘤組織TTS表達(dá)明顯升高(P<0.001、P=O.043);與腫瘤組相比，治療組TTS表達(dá)水平顯著下降(P=0.01)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；腫瘤轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)TTS表達(dá)無(wú)顯著變化(P=O.695)，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)論BALB/c小鼠皮下注射5×106個(gè)A20細(xì)胞建立淋巴瘤動(dòng)物模型操作簡(jiǎn)單，