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文檔簡介
1、目的:觀察亞低溫預處理對體外培養(yǎng)鼠大腦皮質(zhì)細胞類缺血-再灌注損傷的保護作用;探討亞低溫保護作用與亞低溫聯(lián)合藥物預處理保護作用相比較。
方法:取生后24h之內(nèi)的新生SD乳鼠的腦皮質(zhì)細胞,體外培養(yǎng)至第三天,用含2.5ug/ml阿糖胞苷培養(yǎng)基換液一次,抑制神經(jīng)膠質(zhì)細胞及纖維細胞生長,培養(yǎng)至第七天隨機分為五組:A組(實驗對照組),B組(谷氨酸損傷組),C組(亞低溫預處理組),D組(亞低溫聯(lián)合依達拉奉預處理組),E組(亞低溫聯(lián)合丙泊酚預
2、處理組)。C、D和E組分別予以亞低溫、亞低溫聯(lián)合依達拉奉和亞低溫聯(lián)合丙泊酚預處理。24h后B、C、D和E組予以200μmol/L谷氨酸損傷0.5h,所有分組換正常培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)24h后觀察指標。觀察指標為HE染色后顯微鏡下細胞形態(tài)變化和透視電鏡下細胞器的改變、細胞凋亡率、細胞存活率(MTT法)、乳酸脫氫酶(LDH)漏出率、c-fos蛋白。
結(jié)果:1. HE染色后正置顯微鏡下細胞形態(tài)變化:A組大部分細胞形態(tài)基本正常,胞漿呈淡紅色
3、,核呈藍色;極少數(shù)細胞胞漿呈深紅色,核呈藍黑色,核固縮。B組可見較多細胞胞漿呈深紅色,核呈藍黑色,核固縮,軸突皺縮明顯,有的突起斷裂,細胞數(shù)量明顯減少。C、D和E組,均細胞數(shù)量減少不明顯,細胞基本聯(lián)成網(wǎng)狀;可見少量細胞胞漿呈深紅色,核呈藍黑色,核固縮,呈凋亡狀態(tài)。2.透射電鏡下細胞超微結(jié)構(gòu)的改變:A組神經(jīng)細胞膜完整,線粒體和粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)結(jié)構(gòu)完好;B組細胞漿內(nèi)細胞器數(shù)量明顯減少,線粒體出現(xiàn)嚴重腫脹、嵴消失,呈空泡樣或固縮,粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)嚴重擴張
4、,核膜局部可見囊樣改變、溶解、斷裂,染色質(zhì)濃縮、邊聚;C、D和E組病理改變較B組明顯減輕。3.細胞凋亡率、細胞存活率(MTT法)、乳酸脫氫酶(LDH)漏出率、c-fos蛋白結(jié)果類似:各預處理組與B組比較,差異有非常顯著性(P均<0.01);C組與D組比較,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05);C組與E組比較,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
結(jié)論:亞低溫預處理對離體大腦皮層神經(jīng)細胞的谷氨酸損傷有保護作用。亞低溫聯(lián)合丙泊酚預處理組
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