丙泊酚預(yù)處理對乳鼠腦片谷氨酸損傷保護(hù)作用的研究.pdf

1、目的：探索并熟練掌握離體腦片培養(yǎng)技術(shù)；建立離體腦片的谷氨酸損傷模型；探討丙泊酚預(yù)處理對乳鼠腦片谷氨酸損傷的保護(hù)作用。
　　方法：取新生10-15天乳鼠皮層切成400UM厚度的腦片置于有微孔膜的培養(yǎng)皿內(nèi)同時(shí)放入37℃,5％CO2、95%O2的標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)箱保持腦片在氣液界面上進(jìn)行培養(yǎng)。腦片培養(yǎng)成功至第七天隨機(jī)分為四組：A組（正常對照組），B組（谷氨酸損傷組），C組（10mg/l丙泊酚預(yù)處理組），D組（20mg/l丙泊酚預(yù)處理組）。C組和

2、D組分別予以10mg/l、20mg/l丙泊酚預(yù)處理24h后B、C、D組予以1mmol/L谷氨酸損傷0.5h，所有分組換正常培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)24h后觀察。觀察指標(biāo)為：腦片形態(tài)學(xué)觀察；HE染色后腦片組織內(nèi)細(xì)胞形態(tài)變化和透射電鏡下細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)變化；TTC（2,3,5—氯化三苯基四氮唑)染色比色法測定各組腦片組織損傷率；乳酸脫氫酶（LDH）檢測漏出率；使用免疫組織化學(xué)法檢測星形膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)記物膠質(zhì)纖維酸性蛋白（GFAP）表達(dá)的變化。
　　結(jié)果

3、：1.顯微鏡下培養(yǎng)腦片逐漸變薄、細(xì)胞形態(tài)完整、存活良好；HE染色 A組腦片層次清楚，各層神經(jīng)元數(shù)量多、密度大，胞內(nèi)核大而圓呈藍(lán)色，胞漿染色淺呈淡紅色，部分可見明顯核仁，神經(jīng)元周圍有許多圓形或橢圓形膠質(zhì)細(xì)胞。B組腦片結(jié)構(gòu)無A組豐富，神經(jīng)元數(shù)量及密度明顯減少，細(xì)胞空泡狀，胞核固縮，部分細(xì)胞卷曲、皺縮變形，膠質(zhì)細(xì)胞明顯增多。C和D組細(xì)胞數(shù)量減少不明顯，可見少量細(xì)胞胞漿呈深紅色，核固縮。2.透射電鏡下A組見神經(jīng)元細(xì)胞核仁明顯，核染色質(zhì)均勻，核膜

4、呈兩暗一明、均質(zhì)正常；細(xì)胞漿內(nèi)各種細(xì)胞器豐富、正常，見大量散在核糖體，胞漿線粒體、粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)結(jié)構(gòu)完好。B組核染色質(zhì)邊集、核膜破裂，線粒體腫脹空化、嵴消失，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)溶解、消失。C和D組胞膜、核膜正常，胞漿內(nèi)細(xì)胞器數(shù)量明顯減少不如正常組豐富，核膜融合、裂隙增寬，細(xì)胞漿稀疏出現(xiàn)溶解現(xiàn)象，部分粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張見局灶溶解。3.乳酸脫氫酶（LDH）漏出率及皮層腦片TTC染色組織損傷率結(jié)果顯示：C、D組與B組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；D組較C組培養(yǎng)液中

5、LDH釋放量及LDH釋放率減少，二者間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，D組較C組皮層腦片TTC染色吸光度值（A490）高,組織損傷率低,二者間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。4.A組星形膠質(zhì)細(xì)胞均勻分布，細(xì)胞核較小、呈圓形或卵圓形，細(xì)胞突起細(xì)長,GFAP陽性的星形膠質(zhì)細(xì)胞表達(dá)少；B組星形膠質(zhì)細(xì)胞胞體肥大、腫脹、突起增多,GFAP陽性的星形膠質(zhì)細(xì)胞表達(dá)增加，陽性反應(yīng)強(qiáng)；C、D組與B組相比GFAP陽性膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量減少,陽性反應(yīng)減弱,細(xì)胞形態(tài)有所恢復(fù)。
　　結(jié)論：