人真皮干細(xì)胞標(biāo)記示蹤方法的比較研究.pdf

1、研究背景：
　　 干細(xì)胞具有自我更新和多向分化潛能的特性。利用干細(xì)胞移植進(jìn)行疾病治療已成為干細(xì)胞研究的熱點(diǎn)。干細(xì)胞的標(biāo)記和示蹤能夠?yàn)殛U明干細(xì)胞在移植受體內(nèi)的定植、分布、遷移和分化等生物學(xué)行為提供重要依據(jù)，對干細(xì)胞移植研究具有重要意義。本課題擬探討利用熒光染料PKH26、核酸標(biāo)記物BrdU以及人源性細(xì)胞特異性識別抗體等三種方法用于干細(xì)胞體內(nèi)示蹤，分析三種方法的優(yōu)缺點(diǎn)，為研究干細(xì)胞在體移植后的生物學(xué)評價(jià)提供依據(jù)。
　　 研究

2、方法：
　　 第一部分，以人真皮干細(xì)胞為研究對象，觀察熒光染料PKH26、核酸標(biāo)記物BrdU以及三種人源性細(xì)胞特異性識別抗體來體外標(biāo)記和檢測干細(xì)胞的效果。
　　 第二部分，以不同劑量全身輻射C57BL/6J小鼠動物損傷模型作為受試體，以2×106個(gè)細(xì)胞/只尾靜脈移植經(jīng)不同方法標(biāo)記的人真皮干細(xì)胞，于不同時(shí)間點(diǎn)取材，應(yīng)用普通光學(xué)顯微鏡或熒光顯微鏡觀察各種方法檢測細(xì)胞在組織器官中的分布情況。
　　 研究結(jié)果：
　

3、　 本研究主要結(jié)果如下：
　　 1.經(jīng)BrdU體外標(biāo)記的人真皮干細(xì)胞經(jīng)靜脈移植受試小鼠后，可通過抗BrdU抗體檢測到人真皮干細(xì)胞在受試小鼠肺內(nèi)的定植；
　　 2.經(jīng)PKH26體外標(biāo)記的人真皮干細(xì)胞經(jīng)靜脈移植受試小鼠后，未能檢測到人真皮干細(xì)胞在受試小鼠各個(gè)臟器的定植情況；
　　 3.本研究中所嘗試的三種商品化的人源性細(xì)胞特異性識別抗體，其中小鼠抗人β-2-Microglobulin抗體(Santa Cruz，sc

4、-80668)和小鼠抗人endoglin抗體(Dako，M3527)在體外均不能特異性識別人源性細(xì)胞。小鼠抗人nuclei抗體(Millipore，MAB1281)能夠在體外特異性識別人源性細(xì)胞，但人真皮干細(xì)胞經(jīng)靜脈移植受試小鼠后，通過小鼠抗人nuclei抗體未能檢測到人真皮干細(xì)胞在受試小鼠各個(gè)臟器的定植情況。
　　 結(jié)論：
　　 本課題研究中，我們通過利用熒光染料PKH26、核酸標(biāo)記物BrdU以及三種人源性細(xì)胞特異性識

5、別抗體來體外標(biāo)記干細(xì)胞并進(jìn)行體內(nèi)示蹤，比較了三種標(biāo)記方法的優(yōu)缺點(diǎn)。本課題取得的主要研究結(jié)論包括：
　　 1.核酸標(biāo)記物BrdU具有較高的體外標(biāo)記效率和較為穩(wěn)定的體內(nèi)示蹤特性，可作為干細(xì)胞體外標(biāo)記及體內(nèi)示蹤方法應(yīng)用于干細(xì)胞移植研究；
　　 2.熒光染料PKH26具有較高的體外標(biāo)記效率，但用于干細(xì)胞體內(nèi)示蹤時(shí)，其分辨率和信號強(qiáng)度等問題不夠理想；
　　 3.基于人源性細(xì)胞特異性識別抗體的檢測方法在研究干細(xì)胞體內(nèi)示蹤的過