MRI示蹤干細(xì)胞同種異體修復(fù)兔關(guān)節(jié)軟骨缺損的實驗研究.pdf

1、目的：
　　探討靜脈注射USPIO濃度為20mg/kg時，兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的標(biāo)記率及USPIO對兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖性及多向分化能力的影響，并利用MRI活體示蹤USPIO標(biāo)記兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植修復(fù)兔關(guān)節(jié)軟骨缺損的進程及信號強度，為進一步實驗的USPIO靜脈注射濃度的設(shè)置提供實驗基礎(chǔ)。
　　方法：
　　(1)將6只新西蘭白兔完全隨機分為2組，每組3只，以組為單位，實驗組經(jīng)耳緣靜脈注射20mg/kg USPIO，對

2、照組不做任何處理，48h后處死各組兔，分離、培養(yǎng)兔BMSCs至第三代作為實驗對象；
　　(2)普魯士藍(lán)染色測量各組兔BMSCs的磁標(biāo)記率，增強型cck-8試劑盒觀察BMSCs增殖性強弱，并對各組兔BMSCs進行多向誘導(dǎo)分化實驗，觀察成骨、成脂、成軟骨能力的變化；
　?。?）將36只新西蘭白兔完全隨機分為4組，每組9只，制備兔雙膝關(guān)節(jié)軟骨缺損模型，實驗組注入USPIO標(biāo)記兔 BMSCs-海藻酸鈉凝膠復(fù)合體，陽性對照組注入未標(biāo)記

3、兔 BMSCs-海藻酸鈉凝膠復(fù)合體，陰性對照組注入純海藻酸鈉凝膠，空白組不做任何處理，分別于術(shù)后1個月、2個月、3個月進行大體觀察和MRI掃描，并進行組織學(xué)研究。
　?。?）收集數(shù)據(jù)，并進行統(tǒng)計學(xué)分析。
　　結(jié)果：
　?。?）經(jīng)兔耳緣靜脈注射20mg/kg USPIO后提取、培養(yǎng)獲得的兔BMSCs與對照組兔BMSCs相比，細(xì)胞形態(tài)基本相同；
　?。?）普魯士藍(lán)染色顯示經(jīng)USPIO標(biāo)記的兔BMSCs胞質(zhì)內(nèi)可見大量藍(lán)

4、染顆粒，表明USPIO已被兔BMSCs吞噬；利用增強型CCK-8試劑盒反應(yīng)，通過自動酶標(biāo)儀測得吸光度值繪制增殖曲線顯示，濃度為20mg/kg的USPIO不影響兔BMSCs的增殖活性；經(jīng)多向誘導(dǎo)分化實驗后顯示，濃度為20mg/kg的USPIO不影響兔BMSCs的多向分化能力；
　?。?）BMSCs移植治療兔膝關(guān)節(jié)軟骨缺損顯示,隨著時間的遞增，標(biāo)記細(xì)胞移植組與未標(biāo)記細(xì)胞移植組的軟骨缺損逐漸被修復(fù)，純海藻酸鈉移植組與空白組的軟骨缺損修復(fù)

5、緩慢。
　　（4）統(tǒng)計學(xué)分析結(jié)果顯示，BMSCs移植治療兔膝關(guān)節(jié)軟骨缺損后，同時期標(biāo)記細(xì)胞移植組與未標(biāo)記細(xì)胞移植組的修復(fù)效果未見明顯差異（P>0.05），與純海藻酸鈉移植組、空白組修復(fù)效果相比有統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.05）；同時期標(biāo)記細(xì)胞移植組與未標(biāo)記細(xì)胞移植組的軟骨缺損處的SI未見明顯統(tǒng)計學(xué)差異（P>0.05）。
　　結(jié)論：
　?。?）當(dāng)靜脈注射USPIO濃度為20mg/kg時，兔BMSCs可被USPIO標(biāo)記；