Sonic hedgehog信號通路在脂多糖所致小鼠急性肺損傷中的表達變化及意義.pdf

1、目的：探討Sonic hedgehog(SHH)信號通路中的相關(guān)分子SHH、PTC、GLI1在脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）所致的小鼠急性肺損傷（acute lung jinjury, ALI）中的表達變化及意義，為臨床上急性肺損傷的治療提供新的思路。
　　方法：選擇5～7周齡、體質(zhì)量20～25g的雄性BALB/c小鼠作為實驗動物，并隨機分為對照組（腹腔注射等量生理鹽水）、LPS處理組（5mg/kg LPS

2、腹腔注射）、環(huán)巴胺處理組（5mg/kg LPS腹腔注射后30min腹腔注射環(huán)巴胺50mg/kg）。分別于給藥后6h、12h、24h，戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉后留取標(biāo)本，肉眼觀察肺組織大體改變，4％多聚甲醛固定后切片并HE染色觀察肺組織病理學(xué)改變，并做出病理損傷評分;取一肺葉60℃48h烘干后，測定肺組織濕干質(zhì)量比值(wet mass/dry mass，W/D);熒光實時定量PCR檢測不同處理組肺組織腫瘤壞死因子-α(tumer necro

3、sisfactor-alpha，TNF-α)、SHH、PTC及下游轉(zhuǎn)錄因子GLI1的mRNA表達;Western blot檢測各處理組肺組織核因子-κB(nuclear factor-κB，NF-κB)、SHH和GLI1的蛋白表達情況。
　　結(jié)果：對照組肺組織光鏡下可見肺泡腔清晰、無明顯炎性細胞浸潤，病理損傷評分很低;LPS處理組肺組織肺泡充血水腫、肺泡隔明顯增厚，肺間質(zhì)廣泛炎性細胞浸潤，肺組織病理損傷評分明顯高于對照組(P＜0.

4、01);環(huán)巴胺處理組肺泡腔大范圍消失、肺組織大片實變、彌漫炎性細胞浸潤，各時間點肺組織病理損傷評分均較LPS處理組高(P＜0.05)。對照組在各時間點的W/D均較低，LPS處理組各時間點的W/D均較對照組高（6h、12h時P＜0.01，24h時P＜0.05），而環(huán)巴胺處理組的W/D在各時間點均高于LPS處理組(P＜0.05)。對照組TNF-α mRNA的表達在各時間點均較低，LPS處理組TNF-α mRNA的表達在各時間點均明顯高于對照

5、組(P＜0.01)，環(huán)巴胺處理組在12h、24h時TNF-α mRNA的表達較LPS處理組高(P＜0.05)。對照組NF-κB蛋白的表達很低，LPS處理組NF-κB的蛋白表達明顯高于對照組(6h、12h，P＜0.01;24h，P＜0.05)，而環(huán)巴胺處理組NF-κB的蛋白表達較LPS處理組更高(P＜0.01)。對照組SHH、PTC、GLI1的mRNA表達水平均較低。LPS處理組在6h時SHH、PTC、GLI1的mRNA表達水平與對照組無

6、明顯差異(P＞0.05)，而在12h、24h時SHH、PTC、GLI1的mRNA表達均明顯高于對照組(P＜0.01)，且與時間呈正相關(guān)(P＜0.01)。環(huán)巴胺處理組在6h時SHH、PTC、GLI1的mRNA表達與LPS處理組相比無明顯差異(P＞0.05)，12h時SHH、PTC、GLI1的mRNA表達均較LPS處理組降低(P＜0.05)，24h時其表達較LPS處理組明顯下降(SHH P＜0.01，PTC P＜0.05，GLI1 P＜0.

7、01)。對照組各時間點的SHH、GLI1蛋白表達均較低。與對照組相比，LPS處理組在6h、12h、24 h的SHH、GLI1蛋白表達水平均明顯升高(SHH6h P＜0.05，12h、24h P＜0.01;GLI1各時間點P＜0.01)，且與時間呈正相關(guān)(P＜0.01)。環(huán)巴胺處理組SHH、GLI1的蛋白表達水平均較LPS處理組降低(SHH P＜0.01，GLI1 P＜0.05)。
　　結(jié)論：⑴對照組SHH、PTC、GLI1的mRN

8、A表達及SHH、GLI1的蛋白表達量均很低，SHH信號通路處于抑制狀態(tài)，而LPS處理后12h、24h時SHH、PTC、GLI1的mRNA表達量及6h、12h、24h時SHH、GLI1的蛋白表達量均明顯高于對照組，提示在LPS所致的急性肺損傷中存在SHH信號通路的激活，表達量明顯增加。⑵給予SHH信號通路的抑制劑環(huán)巴胺干預(yù)后，12h、24h時SHH、PTC、GLI1的mRNA表達量及SHH、GLI1的蛋白表達量均較單獨LPS處理組下降，提