Sonic hedgehog信號(hào)通路在脂多糖所致小鼠急性肺損傷中的表達(dá)變化及意義.pdf

1、目的：探討Sonic hedgehog(SHH)信號(hào)通路中的相關(guān)分子SHH、PTC、GLI1在脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）所致的小鼠急性肺損傷（acute lung jinjury, ALI）中的表達(dá)變化及意義，為臨床上急性肺損傷的治療提供新的思路。
　　方法：選擇5～7周齡、體質(zhì)量20～25g的雄性BALB/c小鼠作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，并隨機(jī)分為對(duì)照組（腹腔注射等量生理鹽水）、LPS處理組（5mg/kg LPS

2、腹腔注射）、環(huán)巴胺處理組（5mg/kg LPS腹腔注射后30min腹腔注射環(huán)巴胺50mg/kg）。分別于給藥后6h、12h、24h，戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉后留取標(biāo)本，肉眼觀察肺組織大體改變，4％多聚甲醛固定后切片并HE染色觀察肺組織病理學(xué)改變，并做出病理?yè)p傷評(píng)分;取一肺葉60℃48h烘干后，測(cè)定肺組織濕干質(zhì)量比值(wet mass/dry mass，W/D);熒光實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)不同處理組肺組織腫瘤壞死因子-α(tumer necro

3、sisfactor-alpha，TNF-α)、SHH、PTC及下游轉(zhuǎn)錄因子GLI1的mRNA表達(dá);Western blot檢測(cè)各處理組肺組織核因子-κB(nuclear factor-κB，NF-κB)、SHH和GLI1的蛋白表達(dá)情況。
　　結(jié)果：對(duì)照組肺組織光鏡下可見肺泡腔清晰、無明顯炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，病理?yè)p傷評(píng)分很低;LPS處理組肺組織肺泡充血水腫、肺泡隔明顯增厚，肺間質(zhì)廣泛炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，肺組織病理?yè)p傷評(píng)分明顯高于對(duì)照組(P＜0.

4、01);環(huán)巴胺處理組肺泡腔大范圍消失、肺組織大片實(shí)變、彌漫炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，各時(shí)間點(diǎn)肺組織病理?yè)p傷評(píng)分均較LPS處理組高(P＜0.05)。對(duì)照組在各時(shí)間點(diǎn)的W/D均較低，LPS處理組各時(shí)間點(diǎn)的W/D均較對(duì)照組高（6h、12h時(shí)P＜0.01，24h時(shí)P＜0.05），而環(huán)巴胺處理組的W/D在各時(shí)間點(diǎn)均高于LPS處理組(P＜0.05)。對(duì)照組TNF-α mRNA的表達(dá)在各時(shí)間點(diǎn)均較低，LPS處理組TNF-α mRNA的表達(dá)在各時(shí)間點(diǎn)均明顯高于對(duì)照

5、組(P＜0.01)，環(huán)巴胺處理組在12h、24h時(shí)TNF-α mRNA的表達(dá)較LPS處理組高(P＜0.05)。對(duì)照組NF-κB蛋白的表達(dá)很低，LPS處理組NF-κB的蛋白表達(dá)明顯高于對(duì)照組(6h、12h，P＜0.01;24h，P＜0.05)，而環(huán)巴胺處理組NF-κB的蛋白表達(dá)較LPS處理組更高(P＜0.01)。對(duì)照組SHH、PTC、GLI1的mRNA表達(dá)水平均較低。LPS處理組在6h時(shí)SHH、PTC、GLI1的mRNA表達(dá)水平與對(duì)照組無

6、明顯差異(P＞0.05)，而在12h、24h時(shí)SHH、PTC、GLI1的mRNA表達(dá)均明顯高于對(duì)照組(P＜0.01)，且與時(shí)間呈正相關(guān)(P＜0.01)。環(huán)巴胺處理組在6h時(shí)SHH、PTC、GLI1的mRNA表達(dá)與LPS處理組相比無明顯差異(P＞0.05)，12h時(shí)SHH、PTC、GLI1的mRNA表達(dá)均較LPS處理組降低(P＜0.05)，24h時(shí)其表達(dá)較LPS處理組明顯下降(SHH P＜0.01，PTC P＜0.05，GLI1 P＜0.

7、01)。對(duì)照組各時(shí)間點(diǎn)的SHH、GLI1蛋白表達(dá)均較低。與對(duì)照組相比，LPS處理組在6h、12h、24 h的SHH、GLI1蛋白表達(dá)水平均明顯升高(SHH6h P＜0.05，12h、24h P＜0.01;GLI1各時(shí)間點(diǎn)P＜0.01)，且與時(shí)間呈正相關(guān)(P＜0.01)。環(huán)巴胺處理組SHH、GLI1的蛋白表達(dá)水平均較LPS處理組降低(SHH P＜0.01，GLI1 P＜0.05)。
　　結(jié)論：⑴對(duì)照組SHH、PTC、GLI1的mRN

8、A表達(dá)及SHH、GLI1的蛋白表達(dá)量均很低，SHH信號(hào)通路處于抑制狀態(tài)，而LPS處理后12h、24h時(shí)SHH、PTC、GLI1的mRNA表達(dá)量及6h、12h、24h時(shí)SHH、GLI1的蛋白表達(dá)量均明顯高于對(duì)照組，提示在LPS所致的急性肺損傷中存在SHH信號(hào)通路的激活，表達(dá)量明顯增加。⑵給予SHH信號(hào)通路的抑制劑環(huán)巴胺干預(yù)后，12h、24h時(shí)SHH、PTC、GLI1的mRNA表達(dá)量及SHH、GLI1的蛋白表達(dá)量均較單獨(dú)LPS處理組下降，提