疏肝健脾固髓方治療多發(fā)性硬化的臨床及機(jī)制的初步研究.pdf

1、目的:研究多發(fā)性硬化患者外周血T細(xì)胞亞群的變化規(guī)律，探討T細(xì)胞亞群作為多發(fā)性硬化病情變化指標(biāo)和治療依據(jù)的可能性。通過EAE模型探討疏肝健脾固髓方治療多發(fā)性硬化的機(jī)制。
　　 方法:將MS患者按照疾病分期進(jìn)行分類，統(tǒng)計各病期外周血T細(xì)胞亞群的變化。運用聚類分析，探討多發(fā)性硬化的證候特點。疏肝健脾固髓方治療多發(fā)性硬化動物模型后檢測其外周血炎癥細(xì)胞因子蛋白的表達(dá)情況并觀察病理改變。
　　 結(jié)果:
　　 1.臨床研究。<

2、br>　　 1.1、多發(fā)性硬化病人在激素治療期的CD4+T細(xì)胞亞群與病程發(fā)病早期、激素影響期、穩(wěn)定期相比比例增高，差異有顯著意義(P＜0.05);激素治療后CD3+CD19-T細(xì)胞與激素治療期相比比例降低，差異有顯著意義（P＜0.05）。其余各T細(xì)胞亞群在各病期的比較均無顯著性差異（P＞0.05）。
　　 1.2、臨床癥狀研究中大部分病人中均有不同程度的肝郁脾虛證候特點，如情緒低落(50.8％)、兩脅不適(22.2％)、胸悶(

3、31.7％)、心煩(41.3％)、神疲乏力(65.1％)、納少(28.6％)、惡心(12.7％)、呃逆(12.7％)、噯氣(14.3％)、腹脹(22.2％)、胃脘痞滿(28.6％)。聚類分析癥狀，分為三類:第一類:第一簇的癥候表現(xiàn)為水飲、第二簇為痰濁、第三簇為脾虛。第二類:第一簇為心腎陰虛、第二簇為陰虛火旺。第三類為陽虛證的表現(xiàn)。第四類為陰陽兩虛。
　　 2.實驗研究。
　　 2.1、采用MOG35-55免疫C57BL小

4、鼠建立EAE的慢性遷延型模型，發(fā)現(xiàn)小鼠首次發(fā)病時間在免疫后的14-17天，臨床評分為1分左右。發(fā)病的高峰期一般在19-29天，臨床評分在1-2.5分之間。隨后進(jìn)入慢性遷延期，臨床評分維持在1-2分。個別小鼠發(fā)現(xiàn)了復(fù)發(fā)緩解的現(xiàn)象，并且隨著時間的延長，復(fù)發(fā)的頻率和癥狀評分逐漸降低，在3個月左右的時間后可能也與慢性遷延期的小鼠一樣會達(dá)到一個平臺期。
　　 2.2、疏肝健脾固髓方治療多發(fā)性硬化的機(jī)制探討
　　 2.2.1、在C5

5、7BL小鼠EAE模型顯示，IL-21、IL-17F均為致炎性因子，呈現(xiàn)先升高后降低的變化規(guī)律，表明2者在疾病的早期發(fā)揮作用。激素組2者的升高不明顯，中藥組IL-17F則為下降趨勢。
　　 2.2.2、在EAE中TNF-α主要作用是致炎性的，表現(xiàn)為逐漸升高，但在激素組和中藥組則為先下降后升高，尤其在4周時下降較為明顯。
　　 IFN-γ為致炎性因子，在EAE中呈現(xiàn)逐漸升高的趨勢，但在激素組和中藥組呈現(xiàn)先下降后略微升高的趨勢

6、，且在第4周下降最為明顯。
　　 提示激素和中藥可能在疾病發(fā)作前期發(fā)揮抗炎作用，而急性發(fā)作后期抗炎作用逐漸減退。
　　 2.2.3、IL-10和IL-4均為抑炎性因子，在EAE中呈現(xiàn)逐漸升高的趨勢，在中藥組亦表現(xiàn)升高，尤其在8周時IL-10升高更加明顯，激素組則沒有升高趨勢。提示隨著病程進(jìn)展，EAE在急性期炎癥損害髓鞘的同時，也啟動了抗炎機(jī)制。激素在抗炎的同時也抑制了抑炎性的細(xì)胞因子的產(chǎn)生，而中藥保護(hù)了抑制炎性的內(nèi)源性積

7、極因素，對于后期的修復(fù)和減少復(fù)發(fā)有利。
　　 2.2.4、動物病理切片顯示，EAE組腦組織和脊髓組織切片均可見炎癥細(xì)胞浸潤，血管增生等炎癥表現(xiàn)。而在正常組腦組織切片中血管很少增生，未見炎癥細(xì)胞浸潤。
　　 結(jié)論:
　　 1.多發(fā)性硬化發(fā)作期總T細(xì)胞和CD4+T細(xì)胞相對較高，T細(xì)胞的這一規(guī)律可能為成為多發(fā)性硬化病情變化的指標(biāo)。
　　 2.疏肝健脾固髓方治療多發(fā)性硬化的機(jī)制可能是降低了致炎性細(xì)胞因子的表達(dá)，并

8、保護(hù)抑炎性細(xì)胞因子的表達(dá)達(dá)到控制炎癥的作用。雖然抑制炎癥細(xì)胞因子的作用不及皮質(zhì)激素，但對于抑炎細(xì)胞因子具有保護(hù)作用為其特點，這似可以對疏肝健脾固髓方控制急性期癥狀作用不如激素，而具有減少多發(fā)性硬化復(fù)發(fā)作用的臨床現(xiàn)象的解釋。
　　 3.小鼠EAE模型可作為多發(fā)性硬化藥物抗炎作用靶點篩選模型，TNF-α、IFN-γ、IL-21、IL-17F和IL-10、IL-4等指標(biāo)較為敏感，可以用于藥物篩選和判斷療效。為進(jìn)一步的MS藥物治療和藥物