細(xì)小病毒B19檢測(cè)基因芯片的制備及初步研究.pdf

1、該研究首先利用Primer Premier 5.0軟件針對(duì)細(xì)小病毒B19基因組保守區(qū)域設(shè)計(jì)PCR特異性引物.擴(kuò)增特異性片段,純化PCR產(chǎn)物,連接T載體并轉(zhuǎn)化;提取重組質(zhì)粒,測(cè)序鑒定;擴(kuò)增質(zhì)粒,將產(chǎn)物純化并作為基因芯片的探針.用基因芯片點(diǎn)樣儀將探針固定在特殊處理的玻片上.運(yùn)用限制性顯示(RD)技術(shù),用Cy3標(biāo)記的通用引物標(biāo)記樣品,重復(fù)檢測(cè).通過與基因芯片雜交,嚴(yán)謹(jǐn)洗滌,將非特異性的標(biāo)記片段洗脫后,經(jīng)掃描儀掃描,計(jì)算機(jī)解讀.掃描結(jié)果顯示,制

2、備的芯片可有效檢測(cè)出細(xì)小病毒B19基因.其次通過合成儀合成60 mer寡核苷酸探針來制作寡核苷酸基因芯片.根據(jù)GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)中的信息,利用美國(guó)國(guó)家生物技術(shù)信息中心(NCBI)提供的BLAST分析軟件找出細(xì)小病毒B19的保守序列,用生物學(xué)軟件Oligo6.0設(shè)計(jì)10條60 mer Oligo探針.使用ABI公司3900合成儀合成探針,以12％變性PAGE純化探針,制備寡核苷酸基因芯片.將芯片分別與Cy3標(biāo)記的細(xì)小病毒B19基因及正常