AngⅡ在大鼠膜性腎病中對(duì)足細(xì)胞凋亡的影響.pdf

1、目的:探討MN時(shí)，AngⅡ及TGF-β1/P38MAPK通路在足細(xì)胞凋亡中的影響及發(fā)生機(jī)制。
　　方法:雄性SD大鼠120只隨機(jī)分為正常對(duì)照組（A組）、模型組（B組）、造模+貝那普利干預(yù)組（C組）、貝那普利對(duì)照組（D組），每組30只。A組、D組，不預(yù)免，不造模，隔日尾靜脈注射2ml生理鹽水(NS)替代C-BSA，其余兩組均按改良Border法[1]復(fù)制MN大鼠模型;同時(shí)，C組、D組于正式預(yù)免的第1周起，每日以貝那普利(10mg/k

2、g/d)灌胃，而A、B組每日以等量NS代替貝那普利灌胃。正式免疫第1、2、3、4、5、6周末每組各取5只殺檢，取24h尿液檢測(cè)24h尿蛋白定量(24hUTP);取血清檢測(cè)Alb、TG、TC、Scr、BUN;取大鼠腎臟組織制成病理切片進(jìn)行光鏡及免疫熒光鑒定成模情況，同時(shí)用免疫組織化學(xué)方法動(dòng)態(tài)檢測(cè)腎小球中TGF-β1、P38MAPK、Bax、Bcl-2、WT1蛋白的表達(dá)含量，用TUNEL法檢測(cè)各觀察時(shí)間點(diǎn)腎小球細(xì)胞凋亡情況并計(jì)算凋亡指數(shù)(A

3、I)，用Elisa法檢測(cè)腎組織勻漿在各觀察時(shí)間點(diǎn)AngⅡ含量。
　　結(jié)果:(1)腎臟形態(tài)學(xué)改變:A、D組，各觀察時(shí)間點(diǎn)腎臟顏色形態(tài)正常，腎組織未見(jiàn)形態(tài)學(xué)改變，免疫熒光未見(jiàn)IgG顆粒狀沉積;B、C組，隨著實(shí)驗(yàn)時(shí)間延長(zhǎng)，腎臟體積逐漸增大，顏色逐漸變淺至蒼白色，腎臟病理?yè)p傷逐漸加重，腎小球毛細(xì)血管襻IgG熒光顆粒狀沉積明顯。至第4周末時(shí)，腎臟呈“大白腎”樣外觀---形態(tài)腫大，色蒼白;光鏡下HE染色可見(jiàn)腎小球腫大明顯，基底膜(GBM)彌漫

4、性增厚，部分球囊腔狹窄明顯;Masson染色可見(jiàn)部分腎小球上皮下嗜復(fù)紅蛋白沉積，系膜區(qū)及腎間質(zhì)可見(jiàn)藍(lán)色陽(yáng)性物質(zhì)沉積，PASM染色可見(jiàn)部分GBM上皮側(cè)“釘突”形成，甚至形成“假雙軌”征，系膜區(qū)及腎間質(zhì)膠原纖維沉積，纖維化程度加重;免疫熒光顯示腎小球毛細(xì)血管襻和系膜區(qū)IgG熒光較強(qiáng)，強(qiáng)度約為+++～++++。至第6周末時(shí)，腎臟病理?yè)p傷除上述表現(xiàn)外，HE和Masson染色均可見(jiàn)腎間質(zhì)及系膜區(qū)膠原纖維沉積更加明顯。在各觀察時(shí)間點(diǎn)各組間比較，A、

5、D組無(wú)明顯腎臟病理?yè)p害表現(xiàn);B組在各觀察時(shí)間點(diǎn)腎臟病理?yè)p害均較其它三組重，C組腎臟病理?yè)p害較A、D組重，但較B組有所減輕;腎組織IgG熒光強(qiáng)度，B組與C組比較，無(wú)明顯差別(P＞0.05)。(2)腎臟固有細(xì)胞凋亡的動(dòng)態(tài)變化A組、D組大鼠僅可見(jiàn)腎小管少量細(xì)胞凋亡，腎小球未見(jiàn)明顯細(xì)胞凋亡，第1周末至第6周末腎小球AI表達(dá)量無(wú)明顯差異(P＞0.05），D組腎小球AI表達(dá)量與A組相比在各周末無(wú)明顯差異（P＞0.05）;B組、C組從第1周末開(kāi)始可見(jiàn)

6、凋亡細(xì)胞在腎小球臟層分布區(qū)域、系膜區(qū)、腎小管上皮細(xì)胞核表達(dá)，陽(yáng)性細(xì)胞呈棕黃色顆粒狀，且腎小球AI表達(dá)隨造模時(shí)間的延長(zhǎng)，呈逐漸上升趨勢(shì)，與A組相比，差異具有顯著性(P＜0.01);與B組相比，C組腎小球AI表達(dá)量從第1周末開(kāi)始明顯減少，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。(3)腎臟組織TGF-β1、P38MAPK、Bax、Bcl-2及WT-1蛋白的動(dòng)態(tài)表達(dá)A組、D組:TGF-β1、P38MAPK、Bax在腎小球臟層分布區(qū)域、系膜區(qū)、腎小管

7、上皮細(xì)胞胞漿均有少量表達(dá)，Bcl-2在腎小球臟層分布區(qū)域、系膜區(qū)、腎小管上皮細(xì)胞胞漿有較多表達(dá)，WT-1在腎小球臟層分布區(qū)域細(xì)胞核內(nèi)有較多表達(dá)，陽(yáng)性細(xì)胞均呈棕褐色顆粒狀，以上指標(biāo)A、D組在第1、2、3、4、5、6周末表達(dá)量無(wú)明顯差異(P＞0.05)，與A組相比，D組腎小球TGF-β1、P38MAPK、Bax、Bcl-2、WT-1在各周末的表達(dá)無(wú)明顯差異（P＞0.05）。B組、C組:隨著造模時(shí)間不斷延長(zhǎng)，TGF-β1、P38MAPK、Ba

8、x表達(dá)量呈逐漸上升趨勢(shì)，且主要集中表達(dá)在腎小球臟層分布區(qū)域及系膜區(qū)胞漿，腎小管的上皮細(xì)胞胞漿僅有少量表達(dá)或強(qiáng)度較弱，Bcl-2及WT-1表達(dá)隨造模時(shí)間延長(zhǎng)呈逐漸下降趨勢(shì)。與A組相比，B組和C組腎小球TGF-β1、P38MAPK、Bax表達(dá)增加，分別從第2、2、3周末開(kāi)始差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，Bcl-2、WT-1表達(dá)減少，均從第2周末開(kāi)始差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）;與B組相比，C組腎小球TGF-β1、P38MAPK、

9、Bax表達(dá)減少，分別從第4、6、5周末開(kāi)始差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，Bcl-2、WT-1表達(dá)增加，分別從第4、5周末開(kāi)始差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。(4)腎臟組織勻漿AngⅡ含量動(dòng)態(tài)變化:A、D組在各觀察時(shí)間點(diǎn)有AngⅡ表達(dá)，各周末表達(dá)量無(wú)明顯差異(P＜0.05);與A組相比，B、C組從第2周末開(kāi)始，隨著實(shí)驗(yàn)時(shí)間的增加，AngⅡ含量增加明顯，尤以第6周末最為明顯(P＜0.01);與B組相比，C組在各周末AngⅡ的表達(dá)量

10、呈降低趨勢(shì)，從第3周末開(kāi)始差異具有顯著性(P＜0.05)。(5)臨床指標(biāo)變化:A組、D組各項(xiàng)指標(biāo)正常。B、C組TG、TC、Scr、BUN、24hUTP水平較A組在各周末均升高，Alb較A組降低，其中以Alb、24hUTP變化顯著(P＜0.05)。C組在各周末與B組相比較，Alb水平升高，從第5周末開(kāi)始差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，24hUTP水平呈降低趨勢(shì)，但兩組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。(6)6周末各指標(biāo)相關(guān)性分析:在

11、腎小球內(nèi)，B、C組大鼠腎組織AngⅡ含量與腎小球TGF-β1、P38MAPK、Bax、AI、24hUTP呈正相關(guān)，與WT-1、Bcl-2呈負(fù)相關(guān);AI與TGF-β1、P38MAPK、Bax、24hUTP呈正相關(guān)，與WT-1、Bcl-2呈負(fù)相關(guān);WT-1與Bcl-2呈正相關(guān)，與TGF-β1、P38MAPK、Bax、24hUTP呈負(fù)相關(guān);TGF-β1與P38MAPK、Bax、24hUTP呈正相關(guān)，與Bcl-2呈負(fù)相關(guān);P38MAPK與Bax

12、、24hUTP呈正相關(guān)，與Bcl-2呈負(fù)相關(guān);24hUTP與Bax呈正相關(guān)，與Bcl-2呈負(fù)相關(guān)，A組、D組各指標(biāo)間無(wú)明顯相關(guān)關(guān)系。
　　結(jié)論:①M(fèi)N大鼠在造模過(guò)程中存在足細(xì)胞數(shù)量減少現(xiàn)象;足細(xì)胞數(shù)量減少的主要原因可能與足細(xì)胞凋亡相關(guān);②MN大鼠在造模過(guò)程中，腎臟局部產(chǎn)生的AngⅡ可能是通過(guò)激活TGF-β1/P38MAPK通路引起足細(xì)胞凋亡;③貝那普利通過(guò)減少M(fèi)N大鼠腎組織中AngⅡ的產(chǎn)生，由此抑制TGF-β1/P38MAPK通路