表面印跡聚合物對(duì)溶菌酶識(shí)別研究及應(yīng)用.pdf

1、分類號(hào)：TS201密級(jí)：(秘密、機(jī)密、絕密)學(xué)校代碼：10057研究生學(xué)號(hào)：2009808041表面印跡聚合物對(duì)溶菌酶識(shí)別研究及應(yīng)用ResearchandApplicationofSurfaceImprintedPolymerforReeognitonofLysozyme專業(yè)名稱：食品科學(xué)指導(dǎo)教師姓名：方國(guó)臻研究生姓名：翟曉瑞申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：工學(xué)碩士論文提交日期：2012年3月論文課題來源：國(guó)家自然科學(xué)基金學(xué)位授予單位：天津科技大學(xué)摘要分

2、子印跡聚合物具有高選擇性、穩(wěn)定性和實(shí)用性等特點(diǎn)，在復(fù)雜基質(zhì)分離中具有良好的發(fā)展前景，近幾年在生物樣品中的應(yīng)用尤為受到人們關(guān)注。本實(shí)驗(yàn)制備了新型的分子印跡聚合物膜并作為識(shí)別材料選擇性識(shí)別蛋白質(zhì)溶菌酶。實(shí)驗(yàn)以溶菌酶為(LYS)模板分子、丙烯酰胺為功能單體、N，NL亞甲基雙丙烯酰胺為交聯(lián)劑、過硫酸銨和四甲基乙二胺為引發(fā)劑，通過優(yōu)化合成條件，在多壁碳納米管表面合成了對(duì)溶菌酶具有選擇性識(shí)別能力的印跡聚合物膜，利用透射電鏡(TEM)、傅立葉紅外光譜

3、儀(FTIR)、熱重分析儀(TGA)和氮吸附(BET)對(duì)合成的溶菌酶印跡聚合物膜進(jìn)行表征，通過平衡吸附實(shí)驗(yàn)、動(dòng)力學(xué)吸附實(shí)驗(yàn)和選擇性吸附實(shí)驗(yàn)考察了溶菌酶印跡聚合物膜的吸附量、吸附平衡時(shí)間和特異性。結(jié)果表明，當(dāng)溶菌酶濃度為0500mgmL‘1時(shí)，溶菌酶印跡聚合物膜的吸附容量達(dá)到2089mgg～，非印跡聚合物膜的吸附容量是1537mgg～。當(dāng)吸附時(shí)間為30min時(shí)，溶菌酶印跡聚合物膜的吸附量達(dá)到吸附平衡量的8210％，吸附300min達(dá)到平衡

4、。選用細(xì)胞色素C(CytC)、肌紅蛋白(Mb)、血紅蛋白(Hb)和牛血清蛋白(BSA)作為競(jìng)爭(zhēng)蛋白質(zhì)，溶菌酶印跡聚合物膜對(duì)溶菌酶吸附性能優(yōu)于對(duì)競(jìng)爭(zhēng)蛋白質(zhì)的吸附性能，LYS／CytC，LYS／Mb，LYS／Hb，和LYS／BSA的選擇性因子分別為130，130，312和282，溶菌酶印跡聚合物膜的吸附量是非印跡聚合物膜吸附量的186倍。通過上述方法合成溶菌酶印跡聚合物膜后，添加異硫氰酸熒光素異構(gòu)體1(FITC)標(biāo)記所合成的溶菌酶印跡聚合物

5、膜得到溶茵酶印跡熒光聚合物膜，通過FTIR對(duì)溶菌酶印跡熒光聚合物膜進(jìn)行了表征。當(dāng)用溶菌酶印跡聚合物膜吸附溶菌酶時(shí)，隨著溶菌酶濃度的增加，溶菌酶印跡熒光聚合物膜的熒光強(qiáng)度減弱，且溶菌酶印跡熒光聚合物膜的淬滅程度高于非印跡熒光聚合物膜的淬滅程度，印跡因子為338。當(dāng)吸附時(shí)間為60rain時(shí)，溶菌酶印跡熒光聚合物膜的吸附量達(dá)到吸附平衡量的7070％，吸附300min達(dá)到平衡。由于溶菌酶印跡熒光聚合物膜中特異性吸附位點(diǎn)的存在，在其他蛋白質(zhì)存在下