二仙湯對乳腺癌化療性閉經(jīng)的影響及其君藥仙茅、淫羊藿對MCF-7細胞生長的作用.pdf

1、乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤之一。對于絕經(jīng)前乳腺癌患者，絕大多數(shù)的聯(lián)合化療可致暫時性或永久性絕經(jīng)。目前對于化療性閉經(jīng)(CIA)與乳腺癌預(yù)后間的關(guān)系仍然存在爭議，但過早絕經(jīng)所帶來的負面作用卻是顯而易見的。乳腺癌預(yù)后相對較好，經(jīng)有效的綜合治療后存活期逐漸延長，但在乳腺癌存活者中，絕經(jīng)期癥狀是一個非常顯著的問題。因為快速進入閉經(jīng)狀態(tài)，患者表現(xiàn)出的癥狀往往比正常絕經(jīng)時更明顯，帶來許多健康問題，明顯降低了乳腺癌患者的生活質(zhì)量。而目前對于這部分患者

2、，尚未有理想的推薦治療方法。 對于非乳腺癌患者來說，激素替代療法是緩解絕經(jīng)癥狀的一種有效方法。但基于對乳腺癌病因及治療的認知，醫(yī)學(xué)界更多地認為雌激素和/或孕激素治療對乳腺癌患者會引起較大的風(fēng)險。因此，無論醫(yī)師或乳腺癌患者本人對進行雌或孕激素治療都持非常謹慎的態(tài)度。而三苯氧胺(TAM)為雌激素受體調(diào)節(jié)劑，對有正常生理周期的絕經(jīng)前婦女是一種有效的抗腫瘤制劑。因此理論上聯(lián)合雌激素與三苯氧胺治療可能會減少絕經(jīng)后癥狀同時降低雌激素所導(dǎo)致的

3、腫瘤復(fù)發(fā)的危險。但目前的數(shù)據(jù)尚不足以確定這種方法可完全控制癥狀，尚須大樣本的隨機對照試驗以確認其安全性。 中醫(yī)藥在長期的臨床應(yīng)用中，被證明對圍絕經(jīng)期綜合征有較好的療效。二仙湯就是針對圍絕經(jīng)期綜合征在臨床上反復(fù)篩選驗證，最終研制出的以補腎為主的方劑。二仙湯全方由仙茅、淫羊藿、巴戟天、當(dāng)歸、知母和黃柏組成，逐漸成為常用的治療更年期綜合征的代表方。其中仙茅、淫羊藿是二仙湯中的君藥，亦是臨床中治療圍絕經(jīng)期綜合征的常用藥物。但目前的研究對

4、于二仙湯及其君藥仙茅、淫羊藿對卵巢功能低下的作用機制尚未明了，對絕經(jīng)前后婦女及實驗動物性激素水平方面的調(diào)節(jié)，尤其是對血清E<,2>水平的影響，目前的研究結(jié)果尚不一致。由于其可能具有植物雌激素樣的作用，在體內(nèi)生物利用度的變化如何，對內(nèi)分泌系統(tǒng)及全身是否有潛在的副作用，在減輕絕經(jīng)相關(guān)癥狀的同時，對敏感人群是否會提高癌發(fā)生或促使癌轉(zhuǎn)移，與TAM合用是否可以拮抗其對乳腺癌細胞的刺激等均需進一步研究。 故本研究的主要目的即是探討補腎中藥二

5、仙湯對乳腺癌化療性閉經(jīng)的作用，并通過對其君藥仙茅、淫羊藿單用或與三苯氧胺合用，作用于ERl(+)人乳腺癌MCF-7細胞，了解其對乳腺癌細胞促增殖或凋亡的作用，以判斷其應(yīng)用于乳腺癌患者的安全性及有效性。 第一部分：二仙湯對乳腺癌化療性閉經(jīng)的作用 目的：探討中藥補腎法及健脾益氣法對乳腺癌化療性閉經(jīng)的影響。 方法: 本研究設(shè)計為回顧性臨床同期非隨機對照試驗。共納入151例絕經(jīng)前患者，其中補腎法81例，健脾益氣法

6、70例。所有患者手術(shù)前均有正常月經(jīng)，而在手術(shù)后予以標準方案化療后出現(xiàn)閉經(jīng)。分別給予補腎為主的二仙湯及健脾益氣為主的四君子湯治療6月，隨訪2年。比較兩組患者服藥后月經(jīng)恢復(fù)情況及月經(jīng)復(fù)潮間隔時間(化療所致閉經(jīng)至恢復(fù)正常月經(jīng)周期間的間隔時間)，并以更年期綜合征癥狀評分表評價患者治療后更年期癥狀的變化情況。 結(jié)果: 補腎組中患者術(shù)后2年內(nèi)月經(jīng)復(fù)潮者比例為(50/81，61.7％)；而健脾組中患者月經(jīng)復(fù)潮比例為(39/70，55.

7、7％)。行COX回歸分析提示：乳腺癌患者化療后所致閉經(jīng)，影響其恢復(fù)正常月經(jīng)周期的主要因素有年齡、不同的中藥治療方法，以及化療方案。考慮年齡及不同化療方案的影響，接受二仙湯治療的患者月經(jīng)復(fù)潮的可能性為接受四君子湯治療的患者的2.46倍[95％CI：1.538，3.929]。兩組患者治療后月經(jīng)復(fù)潮時間的比較，并無明顯差異(p>0.05)。在改善潮熱、出汗、煩躁絕經(jīng)期癥狀方面，補腎組優(yōu)于健脾組(P<0.05)；而在減輕乏力、眩暈方面，健脾組效

8、果較補腎組為強p<0.05)。在改善憂郁、失眠及關(guān)節(jié)痛方面，二組無明顯統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。 結(jié)論: 與健脾益氣治法比較，二仙湯應(yīng)用于乳腺癌CIA患者，可以明顯改善患者潮熱、出汗、煩躁等絕經(jīng)期癥狀，但患者恢復(fù)正常月經(jīng)周期的可能性增加。由于相對于未進行中藥治療的患者，亦可能有同樣的作用趨勢，進一步的研究應(yīng)考慮行大樣本、多中心研究，通過設(shè)計良好的臨床隨機對照研究或隊列研究，并進行長期的隨訪，以進一步明確二仙湯在乳腺癌C

9、IA患者間應(yīng)用的安全性及有效性。 第二部分：仙茅、淫羊藿對乳腺癌MCF-7細胞增殖及凋亡的影響 目的：探討補腎中藥二仙湯中君藥仙茅、淫羊藿單用或與TAM合用是否有促人乳腺癌MCF-7細胞增殖/凋亡的作用。 材料與方法: 雌激素依賴性人乳腺癌MCF-7細胞以含10％小牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液培養(yǎng)，于實驗加藥前4天改用無酚紅RPMI1640以洗脫細胞中殘留的雌激素。設(shè)立空白、E2及。TAM對照組，觀察

10、二仙湯中兩位君藥仙茅、淫羊藿顆粒劑及含藥血清單用及聯(lián)合TAM在不同劑量和作用時間下對MCF-7細胞生長的影響。應(yīng)用MTT法觀察細胞增殖情況，應(yīng)用Annexin-V+PI雙染法及流式細胞儀觀察細胞凋亡情況。所有資料以均數(shù)±標準差表示，組間比較采用方差分析。以P<0.05為有顯著性差異。 結(jié)果: 仙茅、淫羊藿對乳腺癌MCF-7細胞生長的影響因濃度的不同而不同：不同濃度的仙茅顆粒劑及含藥血清對乳腺癌細胞MCF-7的促增殖作用均

11、不明顯(P>0.05)。10<'-6>mol/L濃度時的淫羊藿對MCF-7細胞有一定的促增殖作用(P<0.05)。但作用較E2為弱。仙茅、淫羊藿的濃度高于10<'-5>mol/L時，細胞生長受抑制(P<0.05)，且隨藥物濃度的增加細胞生長抑制率增大。而濃度低于10<'-7>mol/L，的淫羊藿對細胞促增殖作用不明顯(P>0.05)。不同濃度的仙茅、淫羊藿顆粒劑以及含藥血清與TAM合用均未見明顯的促細胞增殖作用(P>0.05)。高濃度的

12、仙茅顆粒劑及含藥血清對MCF-7細胞生長有一定的抑制作用(P<0.05)，20％的淫羊藿含藥血清可以通過誘導(dǎo)MCF-7細胞凋亡而呈現(xiàn)抗乳腺癌的作用。20％的仙茅、淫羊藿含藥血清與TAM聯(lián)合使用可誘導(dǎo)MCF-7細胞的凋亡(P<0.05)，且隨劑量的增加，這種誘導(dǎo)作用也有所增強，表現(xiàn)出劑量-效應(yīng)關(guān)系。 結(jié)論: 仙茅、淫羊藿與TAM聯(lián)合作用于MCF-7細胞，無明顯促細胞增殖的作用，高劑量的淫羊藿含藥血清甚至有誘導(dǎo)細胞凋亡的作用

13、。而中等劑量的淫羊藿顆?？赡苡腥醮萍に貥幼饔茫杀籘AM拮抗。提示仙茅、淫羊藿臨床上在一定劑量范圍內(nèi)使用是安全的，尤其對ER(+)乳腺癌患者合并TAM治療的情況下。從而為臨床應(yīng)用補腎中藥治療乳腺癌CIA提供了實驗依據(jù)。但其正確的使用方法，包括劑量、作用時間等仍需進一步研究。 綜上所述，本研究發(fā)現(xiàn)對于乳腺癌CIA患者，二仙湯為主的補腎治療方法對于患者恢復(fù)正常月經(jīng)周期，改善絕經(jīng)期癥狀方面有一定的治療效果。而通過對其君藥仙茅、淫羊藿