1，5-二取代苯基-1，4-戊二烯-3-酮類化合物的生物活性篩選及作用機理初步研究.pdf

1、姜黃素具有廣譜、良好的生物活性，但其存在溶解性差、易被氧化、吸收率低等缺點。目前，以姜黃素為先導(dǎo)化合物合成結(jié)構(gòu)更穩(wěn)定、溶解性更好、活性更高的姜黃素衍生物已成為國際新藥開發(fā)領(lǐng)域的一個研究熱點。 為了對姜黃素衍生物進行農(nóng)藥、醫(yī)藥聯(lián)合開發(fā)，本論文以小麥赤霉病原菌(Fusarium graminearum)、辣椒枯萎病原菌(Fusarium oxysporum)、蘋果腐爛病原菌(Cytospora mandshurica)三個常見植物病

2、原菌作為供試對象，對本課題組合成的一系列結(jié)構(gòu)新穎的姜黃素衍生物進行了殺菌活性篩選。另外也以雄性非依賴性前列腺癌細胞PC3、乳腺癌細胞Bcap37、胃癌細胞BGC823為模型對其進行了抗腫瘤活性篩選。同時以PC3細胞為實驗?zāi)Ｐ?，對姜黃素衍生物抗腫瘤細胞增殖機理進行了初步研究，具體內(nèi)容包括：(1)以MTT法對化合物抑制PC3細胞增殖的時間、濃度效應(yīng)進行了分析；(2)采用乳酸脫氫酶(LDH)釋放實驗檢測了化合物對細胞膜通透性的影響；(3)利用

3、AO/EB染色實驗檢測了化合物的細胞毒性和誘導(dǎo)凋亡特性：(4)利用瓊脂糖凝膠電泳檢測了化合物對細胞核DNA的影響；(5)利用聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測化合物對兩個細胞周期蛋白激酶Cdk2和Cdk4磷酸化的影響。 結(jié)果發(fā)現(xiàn)一個具有良好抑菌活性的姜黃素衍生物05245(1，5-二取代苯基-1，4-戊二烯-3-酮)，其在500μg/mL濃度下對小麥赤霉病原菌、辣椒枯萎病原菌、蘋果腐爛病原菌三個植物病原菌的抑制率分別可達72.98％、71.

4、43％、79.23％。它也具有很好的抑制腫瘤細胞增殖活性，其對PC3、BGC823、Bcap37三個腫瘤細胞系作用72 h的IC<,50>分別為1.78μM，2.90μM，4.08μM。另外，麻瘋樹提取物05279和酰腙衍生物cj-10也具有很好的抑制腫瘤細胞增殖的活性。為了使05245(1，5-二取代苯基-1，4-戊二烯-3-酮)的抗腫瘤細胞增殖機理具有可比性，本論文對三個化合物同時進行了研究。MTT實驗表明05245(1，5-二取代

5、苯基-1，4-戊二烯-3-酮)、05279、cj-10三個化合物都以濃度依賴方式抑制PC3細胞增殖；乳酸脫氫酶釋放實驗表明三個化合物均對PC3細胞膜有損傷；AO/EB染色實驗表明三個化合物對PC3細胞有毒性，但是熒光顯微鏡下沒有觀察到凋亡細胞；對PC3細胞DNA進行瓊脂糖凝膠電泳分析發(fā)現(xiàn)，三個化合物對PC3細胞沒有誘導(dǎo)凋亡效應(yīng)；通過Western-blot對PC3細胞內(nèi)兩個調(diào)控細胞周期的重要蛋白激酶Cdk2和Cdk4磷酸化的分析表明，0