細(xì)胞重編程技術(shù)和移植治療視神經(jīng)損傷的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、本文主要從以下幾個(gè)部分展開論述：
　　第一部分 重編程人成纖維細(xì)胞成為視網(wǎng)膜視神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的研究
　　目的:①在重編程獲取來源于病人成纖維細(xì)胞誘導(dǎo)型視網(wǎng)膜視神經(jīng)節(jié)細(xì)胞(hiRGC細(xì)胞);②研究這些細(xì)胞的生物學(xué)特征。
　　方法:①篩選與RGC發(fā)育、分化相關(guān)的誘導(dǎo)因子;②構(gòu)建攜帶有轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)載體;③收集、培養(yǎng)病人頭皮成纖維細(xì)胞;④載體轉(zhuǎn)染和產(chǎn)生人誘導(dǎo)型視網(wǎng)膜視神經(jīng)節(jié)細(xì)胞細(xì)胞;⑤hiRGC細(xì)胞的生物學(xué)特性鑒定;⑥hiRGC

2、細(xì)胞的神經(jīng)電生理特征。
　　結(jié)果:以標(biāo)準(zhǔn)流程培養(yǎng)出病人的頭皮成纖維細(xì)胞，通過轉(zhuǎn)染含有Mash1，Math5和RAX基因的慢病毒表達(dá)載體，獲得了hiRGC細(xì)胞，該細(xì)胞具有神經(jīng)元形態(tài)和生理特征;經(jīng)細(xì)胞免疫組織化學(xué)鑒定和電生理檢測(cè)，證明該hiRGC具有與正常神經(jīng)元相似的生物學(xué)和生理學(xué)特征。
　　結(jié)論:使用Mash1，Math5和RAX三個(gè)基因可將成人成纖維細(xì)胞直接轉(zhuǎn)變成為具有神經(jīng)元細(xì)胞特征的人誘導(dǎo)型視網(wǎng)膜視神經(jīng)節(jié)細(xì)胞。
　　

3、第二部分 視網(wǎng)膜視神經(jīng)節(jié)細(xì)胞移植玻璃體治療視神經(jīng)損傷的效果研究
　　目的:檢測(cè)誘導(dǎo)型視網(wǎng)膜視神經(jīng)節(jié)細(xì)胞在移植進(jìn)動(dòng)物視網(wǎng)膜內(nèi)后的生物學(xué)行為、特征和功能，為證明該類細(xì)胞在體內(nèi)具有生理功能提供證據(jù)。
　　方法:①流式細(xì)胞術(shù)篩選hiRGC細(xì)胞;②制作裸小鼠視神經(jīng)損傷模型;③將hiRGC移植進(jìn)入免疫缺陷鼠視網(wǎng)膜內(nèi)。③檢測(cè)hiRGC細(xì)胞在宿主眼內(nèi)的生理、生化特性;④評(píng)價(jià)hiRGC細(xì)胞移植對(duì)于裸小鼠視神經(jīng)功能恢復(fù)的影響情況。
　　結(jié)