壓力損傷后小梁細(xì)胞中BACE1的表達(dá)變化.pdf

1、目的:探索不同壓力條件下小梁細(xì)胞中BACE1的表達(dá)情況，以期為青光眼病理過(guò)程中的房水循環(huán)障礙發(fā)病機(jī)制提供新的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法:對(duì)人來(lái)源的小梁細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)并建立加壓模型，分別用20mmHg、40mmHg、60mmHg、80mmHg四個(gè)壓力點(diǎn)加壓培養(yǎng)2h，繼而常規(guī)培養(yǎng)條件下分別存活0h、12h、24h、48h;在24只雄性SD大鼠中隨機(jī)選擇20只眼前房加壓注射生理鹽水至110mmHg維持60min建立雙眼高眼壓模型，分別存活6

2、h、12h、1d、3d、7d，另外4只眼前房穿刺作為對(duì)照組;采集人眼標(biāo)本3只，分別來(lái)自于急性眼外傷所致眼高壓和慢性開(kāi)角型青光眼眼高壓患者的眼球，并已征得患者同意。收集各組培養(yǎng)細(xì)胞及小梁網(wǎng)組織冰凍切片，行臺(tái)盼藍(lán)染色檢測(cè)細(xì)胞的活性率，H-E染色觀察細(xì)胞組織結(jié)構(gòu)與形態(tài)，BACE1、FN、LN、NSE、Ⅷ因子免疫化學(xué)染色檢測(cè)。
　　結(jié)果:1、免疫化學(xué)染色顯示人眼小梁細(xì)胞NSE、FN、LN染色呈陽(yáng)性表達(dá)，Ⅷ因子染色呈陰性表達(dá)。20mmHg、

3、40mmHg壓力培養(yǎng)時(shí)，HE染色結(jié)果顯示細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)與對(duì)照組相比變化不大，臺(tái)盼藍(lán)染色顯示細(xì)胞的存活率與對(duì)照組相比沒(méi)有太大變化，但是當(dāng)壓力升高到60mmHg與80mmHg時(shí)，HE染色可見(jiàn)部分細(xì)胞的細(xì)胞壁皺縮，輪廓模糊且胞漿內(nèi)出現(xiàn)少量空泡，臺(tái)盼藍(lán)染色顯示細(xì)胞死亡率明顯上升。免疫化學(xué)染色顯示LN的表達(dá)在加壓的初始階段逐漸增高，但是在壓力升高到40mmHg時(shí)，隨著壓力的增高和存活時(shí)間的延長(zhǎng)，LN的表達(dá)開(kāi)始下調(diào)，壓力增加到80mmHg，存活48h

4、時(shí)，LN降低十分明顯;而B(niǎo)ACE1的表達(dá)則呈現(xiàn)表達(dá)逐漸增強(qiáng)的趨勢(shì)。2、正常大鼠眼球的小梁組織可見(jiàn)較強(qiáng)的帶型LN免疫陽(yáng)性產(chǎn)物，但未見(jiàn)BACE1的免疫陽(yáng)性表達(dá)或僅有少量的表達(dá)，高眼壓損傷后6h、12h組可見(jiàn)LN的免疫表達(dá)減弱，小梁組織外層可見(jiàn)明顯的BACE1免疫陽(yáng)性表達(dá)，高眼壓損傷后1d開(kāi)始至7d，LN的免疫表達(dá)進(jìn)一步降低，BACE1的表達(dá)則逐漸增強(qiáng)。3、人慢性開(kāi)角型青光眼眼球的小梁網(wǎng)組織中可見(jiàn)明顯的BACE1免疫陽(yáng)性產(chǎn)物，急性眼外傷致眼壓