人3、7型腺病毒單克隆抗體制備及應(yīng)用研究.pdf

1、目的:
　　在先前的研究中，本課題組將人7型腺病毒的中和表位嵌入3型腺病毒載體衣殼，構(gòu)建出人3、7型嵌合腺病毒rAdMHE3。本論文旨在用rAdMHE3作為抗原免疫小鼠，并采用雜交瘤技術(shù)制備出針對(duì)人7型腺病毒的具有中和活性的單克隆抗體（中和單抗），探討采用衣殼嵌合策略構(gòu)建的重組腺病毒用作免疫原，制備針對(duì)嵌入的中和表位的中和單抗的可行性；制備出人3型腺病毒的中和單抗，并用這些單抗對(duì)人3型腺病毒的中和表位進(jìn)行鑒定；制備出針對(duì)人3型腺病

2、毒的一系列單抗，并從中篩選出腺病毒直接免疫熒光法檢測(cè)用的單抗，為建立腺病毒的直接免疫熒光檢測(cè)方法奠定基礎(chǔ)。
　　方法：
　　用HEp-2細(xì)胞或AD293細(xì)胞擴(kuò)增rAdMHE3，后者用氯化銫梯度離心純化后免疫BALB/c小鼠，用雜交瘤技術(shù)制備出針對(duì)rAdMHE3的單抗。用體外腺病毒中和實(shí)驗(yàn)篩選出中和單抗，蛋白免疫印跡實(shí)驗(yàn)（Western blot）、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）和抗體結(jié)合競(jìng)爭(zhēng)ELISA對(duì)中和單抗進(jìn)行鑒定。用直

3、接免疫熒光實(shí)驗(yàn)篩選出腺病毒直接免疫熒光法檢測(cè)用的單抗。
　　結(jié)果：
　　共獲得22株針對(duì)rAdMHE3的單抗，從中經(jīng)體外腺病毒中和實(shí)驗(yàn)篩選出3株特異中和人3型腺病毒的單抗、4株特異中和人7型腺病毒的單抗。經(jīng)進(jìn)一步鑒定，4株人7型腺病毒中和單抗均識(shí)別7型腺病毒的六鄰體高變區(qū)5內(nèi)的血清型特異性中和表位，并且該表位被證明是構(gòu)象表位；3株人3型腺病毒中和單抗識(shí)別的表位均為線性表位，且該表位位于3型腺病毒的六鄰體高變區(qū)4。經(jīng)直接免疫熒