TNF-α對成牙骨質(zhì)細胞增殖、凋亡、RANKL-OPG mRNA表達影響的實驗研究.pdf

1、目的：
　　本實驗通過研究不同濃度TNF-α對成牙骨質(zhì)細胞增殖、凋亡、RANKL/OPG mRNA表達的影響，為探討TNF-α在牙根吸收中的生物學(xué)機制提供實驗依據(jù)。
　　方法：
　　將體外培養(yǎng)的成牙骨質(zhì)細胞株OCCM-30分為6組：實驗組5組，對照組1組。實驗組分別加入濃度為5ng/ml、10ng/ml、25ng/ml、50ng/ml、100ng/ml TNF-α的培養(yǎng)液，對照組加入不含TNF-α的培養(yǎng)液。
　　

2、1、采用MTT法檢測TNF-α作用24h、48h、72h后OCCM-30細胞增殖變化；2、采用流式細胞術(shù)檢測TNF-α作用48h后OCCM-30細胞凋亡變化；
　　3、采用RT-PCR檢測TNF-α作用24h后OCCM-30 RANKL/OPG mRNA的表達。實驗數(shù)據(jù)導(dǎo)入SPSS19.0軟件進行統(tǒng)計分析與處理。
　　結(jié)果：
　　1、MTT法結(jié)果顯示：不同濃度的TNF-α作用24h時，5ng/ml組OCCM-30細胞吸

3、光度值比對照組增高，25ng/ml、50ng/ml、100ng/ml組的吸光度值比對照組降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。TNF-α作用48h和72h時，各實驗組細胞的吸光度值與對照組相比逐漸降低，差異有明顯統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01)。
　　2、流式細胞術(shù)結(jié)果顯示：不同濃度的TNF-α作用48h時，與對照組相比，實驗組OCCM-30的晚期凋亡率隨著TNF-α濃度的上升而逐漸增高，各組間比較差異具有明顯統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01

4、)。
　　3、RT-PCR結(jié)果顯示：TNF-α作用24h時，與對照組相比，5ng/ml組OCCM-30的RANKL表達減弱，50ng/ml和100ng/ml組RANKL表達增強，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05)。5ng/ml、10ng/ml的TNF-α對OPG mRNA的表達和RANKL/OPG的比值無明顯影響。25ng/ml、50ng/ml、100ng/ml的TNF-α能夠抑制OPG mRNA的表達，并顯著上調(diào)RANKL/OPG

5、的比值，以100ng/ml TNF-α作用最為明顯，差異具有明顯統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01)。
　　結(jié)論：
　　1、TNF-α對成牙骨質(zhì)細胞的增殖具有雙向調(diào)節(jié)作用，低濃度短時間促進細胞增殖，高濃度抑制細胞增殖，且抑制作用呈濃度依賴性和時間依賴性。
　　2、TNF-α能夠誘導(dǎo)成牙骨質(zhì)細胞的凋亡，且誘導(dǎo)作用呈濃度依賴性。
　　3、高濃度的TNF-α能夠促進成牙骨質(zhì)細胞RANKL的表達，抑制OPG的表達，升高 RANKL