純鈦鈦片表面改性對MG-63細(xì)胞分泌和表達(dá)OPG-RANKL mRNA影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：本課題主要研究純鈦鈦片表面改性后的表面微形貌對MG-63人成骨樣細(xì)胞分泌和表達(dá)OPG/RANKL mRNA的影響，從細(xì)胞和分子生物學(xué)角度探討生物材料表面微形貌與MG-63人成骨樣細(xì)胞生物學(xué)行為的相關(guān)性，為研究鈦種植體一骨組織界面的作用機(jī)理以及鈦種植體的表面改性和臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。 材料和方法： 1．采用砂磨拋光，陽極氧化和噴砂-酸堿處理的方法構(gòu)建三種不同的鈦片表面微形貌，分別記為PT組，AO組和SB-AB組。掃

2、描電子顯微鏡(SEM)觀測鈦片表面微形貌，AMBIOS XP-2臺階儀測量表面粗糙度。 2．MG-63人成骨樣細(xì)胞接種于改性后的鈦表面和對照玻片表面，收集第2，4，6，8天的細(xì)胞采用RT-PCR和real timePCR法檢測OPG mRNA的表達(dá)量。 3．MG-63人成骨樣細(xì)胞接種于改性后的鈦表面和對照玻片表面，收集第2，4，6，8天的細(xì)胞采用RT-PCR和real timePCR法檢測RANKL mRNA的表達(dá)量。

3、 結(jié)果： 1．處理后的鈦片經(jīng)掃描電鏡觀察均具有各自典型的特征形貌，PT組表面為方向一致的機(jī)械劃痕；AO組表面形成孔隙均勻分布的蜂窩狀表面，微孔大小約0.5-1um；SB-AB組表面具有多孔網(wǎng)狀的凝膠層結(jié)構(gòu)，孔隙直徑在5-10um之間。粗糙度測試結(jié)果為SB-AB組>PT組>AO組，其中SB-AB組的粗糙度平均值為3.4um。 2．MG-63人成骨樣細(xì)胞與不同表面改性的鈦片共同培養(yǎng)，所分泌的OPGmRNA具有表面依賴性

4、和時(shí)間依賴性。OPG對不同表面改性后的鈦片表面微形貌的調(diào)控具有敏感性，SB-AB組和AO組對OPGmRNA有明顯上調(diào)優(yōu)勢；OPGmRNA的表達(dá)和時(shí)間呈正相關(guān)。表面微形態(tài)和時(shí)間還存在交互作用，對MG-63細(xì)胞OPGmRNA的調(diào)控有協(xié)同效應(yīng)。 3．MG-63人成骨樣細(xì)胞與不同表面改性的鈦片共同培養(yǎng)，粗糙度較大的SB．AB組和PT組表面表達(dá)的RANKL mRNA高于AO組和對照組。其時(shí)相性在第6天出現(xiàn)峰值，之后呈下降趨勢。 結(jié)

5、論： 1．不同的表面改性方法形成不同的鈦表面微形貌，PT組表面以方向一致的機(jī)械劃痕為特征；AO組具有均勻的蜂窩狀微：SB-AB組可獲得大孔勘套小孔的多孔隙結(jié)構(gòu)，同時(shí)表面生成鈦凝膠層。 2．OPG mRNA在鈦片表面的表達(dá)呈表面依賴性和時(shí)間依賴性。一定表面粗糙度和微孔結(jié)構(gòu)以及足夠的作用時(shí)間對OPG mRNA的表達(dá)有上調(diào)優(yōu)勢，表面微形態(tài)和時(shí)間對OPG mRNA的表達(dá)有協(xié)同作用。 3．RANKL mRNA的表達(dá)與材料表