高糖改變體外培養(yǎng)海馬神經(jīng)元細(xì)胞MLCK表達(dá)及其對細(xì)胞微絲骨架的影響.pdf

1、目的：通過原代培養(yǎng)SD新生鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞，觀察高糖環(huán)境下神經(jīng)元細(xì)胞形態(tài)、超微結(jié)構(gòu)及應(yīng)用Western blot檢測MLCK及F-actin的表達(dá)改變，探討高糖對神經(jīng)元細(xì)胞MLCK表達(dá)及神經(jīng)元細(xì)胞骨架的影響。
　　方法：1.海馬神經(jīng)元原代培養(yǎng)及純度鑒定：在適宜條件下培養(yǎng)SD新生鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞，倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞的形態(tài)并用NSE免疫組化鑒定其純度；2.高糖對海馬神經(jīng)元細(xì)胞形態(tài)及超微結(jié)構(gòu)的影響：根據(jù)培養(yǎng)基中糖濃度不同，設(shè)立對照組和

2、高糖組，其中含25mmol/L葡萄糖為常規(guī)培養(yǎng)神經(jīng)元細(xì)胞的對照組，45mmol/L葡萄糖為高糖組，應(yīng)用倒置顯微鏡、電子顯微鏡觀察各組海馬神經(jīng)元細(xì)胞形態(tài)及超微結(jié)構(gòu)；3.高糖對MLCK表達(dá)改變及其對細(xì)胞骨架影響：使用Western blot技術(shù)檢測各組細(xì)胞內(nèi)MLCK、F-actin表達(dá)，同時分析MLCK表達(dá)與F-actin表達(dá)的相關(guān)性，探討高糖環(huán)境對MLCK及神經(jīng)元細(xì)胞微絲骨架的影響。
　　結(jié)果：1.成功培養(yǎng)海馬神經(jīng)元細(xì)胞，倒置顯微鏡

3、下觀察培養(yǎng)7d的神經(jīng)元形態(tài)成熟，體積較大，聚集存活，光暈明顯；突起發(fā)達(dá)并向外延伸，互相連接形成密集交錯的網(wǎng)絡(luò)。經(jīng)鑒定細(xì)胞純度達(dá)90％以上；2.與對照組相比，高糖組海馬神經(jīng)元細(xì)胞突觸縮短，超微結(jié)構(gòu)顯示細(xì)胞核形態(tài)不規(guī)則，細(xì)胞微絲骨架不完整；3.與對照組相比，高糖組細(xì)胞內(nèi)F-actin表達(dá)降低（P＜0.05），MLCK表達(dá)增高（P＜0.05），且MLCK的表達(dá)與F-actin表達(dá)呈負(fù)相關(guān)關(guān)系（P＜0.05，r=-0.838）。
　　結(jié)論