多酚氧化酶特異性卵黃抗體的制備及其抑制蝦類黑變效果研究.pdf

1、由多酚氧化酶導(dǎo)致的蝦體黑變是蝦類產(chǎn)品加工過程中影響產(chǎn)品感官質(zhì)量和商品價值的重要因素之一，針對多酚氧化酶活性的抑制，研究開發(fā)安全、高效的生物材料應(yīng)用于蝦類黑變控制是目前研究的熱點。卵黃抗體（IgY）作為禽類血清中IgG轉(zhuǎn)移到卵黃中形成的唯一一類免疫球蛋白，其與抗原結(jié)合后可顯著影響抗原物質(zhì)的活性，可作為一種潛在的新型生物保鮮劑。
　　本研究以南美白對蝦作為研究對象，以提取純化的南美白對蝦體內(nèi)的多酚氧化酶作為抗原免疫蛋雞，制備特異性卵黃

2、抗體，研究卵黃抗體對多酚氧化酶活性的抑制效應(yīng)，并以南美白對蝦為實驗樣本驗證卵黃抗體抑制蝦體黑變效果，綜合感官評定、TVB-N含量、pH值及微生物指標，評價卵黃抗體的保鮮性能。研究的主要結(jié)果如下：
　　利用丙酮沉淀純化，Sephadex G-100凝膠層析，DEAE Sephadex A-50離子交換層析對南美白對蝦體內(nèi)多酚氧化酶進行分離純化，并利用SDS-PAGE凝膠電泳對純化后的多酚氧化酶純度進行鑒定。經(jīng)測定，粗酶液酶活為0.4

3、5 U/mg，總蛋白量為10940.2 mg，經(jīng)三步純化，多酚氧化酶酶活為14.4 U/mg，純化倍數(shù)為32倍，蛋白回收率為1.19％，活力回收率為38%。經(jīng)SDS-PAGE電泳鑒定，純酶分子量約為45 kD，純度達到電泳級。
　　以純化后的多酚氧化酶為抗原免疫蛋雞，提取制備蛋黃中的IgY，并對其免疫活性進行測定。經(jīng)三次注射免疫后，卵黃中的IgY的效價可達到1:2000左右，并可維持較長時間； IgY具有較好的理化穩(wěn)定性，在35-

4、60℃免疫活性可保持在90%左右，在pH5~9時其活性保持在50%以上。
　　特異性IgY對多酚氧化酶活性具有顯著的抑制效應(yīng)，且抑制效應(yīng)與 IgY濃度呈正相關(guān)，IgY濃度越大，抑制效果越明顯。在0℃與37℃下，0.5 mg/mL的特異性 IgY即可顯現(xiàn)抑制效果，作用時間為1 min時，多酚氧化酶活性已降低30%，隨著IgY濃度的增加，酶活抑制效果也逐漸增大，當IgY濃度達到5 mg/mL時，酶活性可降低80%。
　　實際樣本