多酚氧化酶特異性卵黃抗體的制備及其抑制蝦類黑變效果研究.pdf

1、由多酚氧化酶導致的蝦體黑變是蝦類產品加工過程中影響產品感官質量和商品價值的重要因素之一，針對多酚氧化酶活性的抑制，研究開發(fā)安全、高效的生物材料應用于蝦類黑變控制是目前研究的熱點。卵黃抗體（IgY）作為禽類血清中IgG轉移到卵黃中形成的唯一一類免疫球蛋白，其與抗原結合后可顯著影響抗原物質的活性，可作為一種潛在的新型生物保鮮劑。
　　本研究以南美白對蝦作為研究對象，以提取純化的南美白對蝦體內的多酚氧化酶作為抗原免疫蛋雞，制備特異性卵黃

2、抗體，研究卵黃抗體對多酚氧化酶活性的抑制效應，并以南美白對蝦為實驗樣本驗證卵黃抗體抑制蝦體黑變效果，綜合感官評定、TVB-N含量、pH值及微生物指標，評價卵黃抗體的保鮮性能。研究的主要結果如下：
　　利用丙酮沉淀純化，Sephadex G-100凝膠層析，DEAE Sephadex A-50離子交換層析對南美白對蝦體內多酚氧化酶進行分離純化，并利用SDS-PAGE凝膠電泳對純化后的多酚氧化酶純度進行鑒定。經測定，粗酶液酶活為0.4

3、5 U/mg，總蛋白量為10940.2 mg，經三步純化，多酚氧化酶酶活為14.4 U/mg，純化倍數為32倍，蛋白回收率為1.19％，活力回收率為38%。經SDS-PAGE電泳鑒定，純酶分子量約為45 kD，純度達到電泳級。
　　以純化后的多酚氧化酶為抗原免疫蛋雞，提取制備蛋黃中的IgY，并對其免疫活性進行測定。經三次注射免疫后，卵黃中的IgY的效價可達到1:2000左右，并可維持較長時間； IgY具有較好的理化穩(wěn)定性，在35-

4、60℃免疫活性可保持在90%左右，在pH5~9時其活性保持在50%以上。
　　特異性IgY對多酚氧化酶活性具有顯著的抑制效應，且抑制效應與 IgY濃度呈正相關，IgY濃度越大，抑制效果越明顯。在0℃與37℃下，0.5 mg/mL的特異性 IgY即可顯現(xiàn)抑制效果，作用時間為1 min時，多酚氧化酶活性已降低30%，隨著IgY濃度的增加，酶活抑制效果也逐漸增大，當IgY濃度達到5 mg/mL時，酶活性可降低80%。
　　實際樣本