應用原生質(zhì)體技術(shù)篩選高產(chǎn)耐堿性的脂肪酶菌株的試驗.pdf_第1頁
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1、浙江工業(yè)大學碩士學位論文應用原生質(zhì)體技術(shù)篩選高產(chǎn)耐堿性的脂肪酶菌株的試驗姓名：單志文申請學位級別：碩士專業(yè)：生物工程指導教師：周曉云2001.5.1AbstractThisarticleprovidesagoodwaytogetastrainwithhighabilityofproducinglipaseFirstlyyeastsaremadeageneticalmarker，whichisnecessaryforscreeningla

2、terSecondlythefactorsthatwillinfluenceprotoplastsofyeastsandstreptomycetesandtheirdistantrelatedfusionareinvestigatedFinallythedeterminationofgrowthcurve，theobservationofcolonialmorphologyandtheassayoflipaseactivityareco

3、nductedaftergainingthefusantAlysinedefectivestrainisgainedbymutagenesisintheexperimentforimpartinggeneticalmarkertoyeastTheexperimentadoptsmycostatininspissaationtoenrichauxotrophsTheoptimalmutagenicconditionsareDESconsi

4、stency(3％)and90minactingtimeorDESconsistency(3％)州th60minactingtimeandUVradiation(2min)Theoptimalconditionformycostatinenrichmentismycostatinconsistency(100u／g)and60rainactingtimeIntheprocedureofpreparingforprotoplastsofy

5、eastsandstreptomycetes，thesorbitol(O8mol／L)actasthestabilizerwhencellwallsofyeastsarebroken，whilesaccharose(05mol／L)areusedatcellregeneration；theenzymesusedforbreakingcellwallsarehelicase(1％)andcellulase(1％)withtherighta

6、mountoflysozyme，theactingtimeisrangingfrom210minto240min；pretreatmentagentismercaptoethanol(01％)whichgetfromEDTAsolution(O1％)，theactingtimeis30minSaccharoseactsasthestabilizerforStreptomyceteandlysozyme(2％，1015minactingt

7、ime)isusedtobreakcellwall，thereisnopretreatmentagenthereThefactorsthatwillinfluencefusionrateintheprocedureoffusontarelistedinsequenceoftheireffectivity：theconcentrationofCaCl2theactingtimeofPEGtheconcentrationofPEG，thec

8、oncentrationofcalciumioninfluencethefusonrateobviouslyTheoptimalfusionconditionisthefollowing：PEGconsistency(35％)，CaCl2consistency(50mmol／L)，theactingtimeofPEG(30min)，thestabilizerofsaccharose(O5mol／L)，pH70Intheprocedure

9、ofidentifyingfusants，thereisnomyceliumfoundfromthecolonialmorphologyoftheselectedfusant，theappearanceoftheselectedfusantlooksliketheparentyeastwithlargersizescolonyandcellLogarithmicgrowthphaseofthefusantappearat32—36h，i

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