禽蛋膽固醇檢測方法的研究及應(yīng)用.pdf

1、禽蛋中膽固醇含量很高，多數(shù)消費者對其食用有所顧慮。目前關(guān)于禽蛋膽固醇在人體內(nèi)的代謝機(jī)制尚不明確，但準(zhǔn)確測定出禽蛋膽固醇含量是十分必要的。目前，國內(nèi)還沒有針對禽蛋膽固醇檢測的標(biāo)準(zhǔn)化方法，本課題對超聲波輔助皂化結(jié)合RP-HPLC檢測蛋黃膽固醇的方法進(jìn)行了優(yōu)化，建立了分散固相萃取結(jié)合RP-HPLC檢測蛋黃膽固醇方法，并對這兩種方法進(jìn)行了比較，研究分析了不同種類禽蛋及蛋制品中膽固醇含量，并對孵化期間受精蛋蛋黃中膽固醇含量變化規(guī)律進(jìn)行了研究。主要

2、結(jié)果如下:
　　 超聲波輔助皂化提取蛋黃膽固醇的最佳反應(yīng)條件是:皂化溫度70℃，皂化時間30 min，超聲波功率500 W，同時優(yōu)化了RP-HPLC檢測蛋黃膽固醇的色譜條件。在這些條件下，樣品12min內(nèi)完成分離，線性范圍為0.106～1.06 mg/mL，相關(guān)系數(shù)＞0.99，方法學(xué)驗證結(jié)果表明:該方法精密度（RSD為3.27％）、重現(xiàn)性（RSD為3.40％）及加標(biāo)回收率（回收率范圍82.8％～94.6％，RSD為4.35％）的

3、RSD均較小，方法檢測限可達(dá)33.3 mg/kg（換算成實際樣品重量），表明該方法精密度良好，重現(xiàn)性好，測定結(jié)果準(zhǔn)確可靠，而且樣品待測液在15 h是比較穩(wěn)定的（RSD為2.11％）。
　　 采用上述方法測定了九斤黃褐殼雞蛋、白來航白殼雞蛋、烏雞蛋、綠殼雞蛋、土雞蛋、低膽固醇雞蛋、鴨蛋、鵪鶉蛋這八種禽蛋的膽固醇含量。其中，土雞蛋膽固醇含量最大（241.85 mg/枚），鵪鶉蛋含量最低（45.32 mg/枚）(P＜0.05)。

4、>　　 但是研究過程中逐漸發(fā)現(xiàn)上述前處理方法，有機(jī)試劑消耗量大、前處理耗時較長，不適合批量、快速檢驗。為此，我們通過單因素和正交實驗方法對分散固相萃取蛋黃膽固醇前處理方法進(jìn)行了優(yōu)化，得到最佳反應(yīng)條件為:蛋黃液與異丙醇的料液比1∶20，濃氨水用量4.0 mL、2 mol/L KOH甲醇溶液2.0 mL，(NH4)2SO4用量8 g，吸附劑為NH2，并優(yōu)化了RP-HPLC檢測膽固醇含量的色譜條件。在此條件下，前處理僅需15min，待測液1

5、5 min內(nèi)完成分離，線性范圍為0.1036～1.036 mg/mL，相關(guān)系數(shù)＞0.99。方法學(xué)驗證結(jié)果表明:該方法精密度(RSD為3.06％)、重現(xiàn)性（RSD為3.03％）及加標(biāo)回收率（回收率范圍93.8％～102.5％）的RSD均較小，方法檢測限可達(dá)30.63 mg/kg（換算成實際樣品重量），表明該方法精密度良好，重現(xiàn)性好，測定結(jié)果準(zhǔn)確可靠，而且樣品待測液在24 h是比較穩(wěn)定的（RSD為2.09％）。
　　 分散固相萃取法

6、將萃取純化和結(jié)合態(tài)膽固醇的水解同時進(jìn)行，簡化了試驗操作步驟。有機(jī)溶劑用量少，進(jìn)樣分析前不需要蒸發(fā)濃縮，而且在室溫下皂化，能有效避免因膽固醇發(fā)生氧化而造成的膽固醇測定值偏低的現(xiàn)象。最后對上述兩種方法進(jìn)行了比較，測定結(jié)果基本一致，但分散固相萃取法可以明顯縮短前處理時間，有效提高分析效率。
　　 研究表明，受精蛋和非受精蛋在孵化條件下，蛋黃膽固醇總量均隨孵化時間增加而逐漸降低，但是這兩種蛋膽固醇的變化規(guī)律有所不同。就受精蛋而言，孵化0

7、-2 d，曲線較為平緩，蛋黃中膽固醇總量幾乎不變，隨后下降速度逐漸加快。13-21 d的下降速率明顯快于4-13 d(P＜0.05)，出雛時膽固醇總量降至93.32mg，僅為入孵前的42.88％。就非受精蛋而言，孵化0-13 d曲線較為平緩，蛋黃中膽固醇總量幾乎不變，13 d以后，下降速度逐漸加快。21d時膽固醇總量降至134.13mg，相當(dāng)于入孵前的65.23％。揭示了孵化期間受精蛋與非受精蛋膽固醇總量變化的差異，相關(guān)性分析表明:受精

8、蛋膽固醇總量的變化與雞胚重量極顯著負(fù)相關(guān)（相關(guān)系數(shù)0.9569，P＜0.01），與蛋黃脂肪總量極顯著正相關(guān)（相關(guān)系數(shù)為0.9638，P＜0.01），與胚盤DNA含量極顯著負(fù)相關(guān)（相關(guān)系數(shù)0.8460，P＜0.01），與失重率顯著顯著負(fù)相關(guān)（相關(guān)系數(shù)0.7088，P＜0.05）初步證實了受精蛋中蛋黃膽固醇總量變化與雞胚生長狀況、脂類代謝速度具有一定相關(guān)性。
　　 禽蛋制品中的膽固醇含量會因加工方式的不同而不同。鮮鴨蛋經(jīng)加工制成咸鴨