微生物酶法拆分丙型肝炎NS3酶抑制劑類藥物的手性中間體.pdf

1、乙烯基取代環(huán)丙烷氨基酸衍生物被廣泛應(yīng)用于藥物的合成領(lǐng)域。其中(1R，2S)-1-氨基-2-乙烯基環(huán)丙烷甲酸酯類衍生物是用于合成丙型肝炎NS3酶抑制劑類藥物的重要手性中間體，目前對其的手性合成主要還是利用化學(xué)方法，微生物酶的高效拆分方法的研究還較為匱乏。
　　本課題中，我們以1-氨基-2-乙烯基環(huán)丙烷甲酸乙酯鹽酸鹽為唯一碳源，首次從不同來源的100份土樣中，篩選獲得能夠利用該底物的菌株378株，其中能夠選擇性水解(1S,2R)-N-

2、Boc-1-氨基-2-乙烯基環(huán)丙烷甲酸乙酯類衍生物的共有54株，選擇性水解(1R，2S)-1-氨基-2-乙烯基環(huán)丙烷甲酸乙酯類衍生物的共有15株。經(jīng)過傳代和鑒定，最終獲得拆分效果最優(yōu)的菌株CY-2，鑒定為Sphingomonas aquatilisJSS7。
　　對CY-2的底物拆分條件進行了優(yōu)化，底物濃度1 g·L-1，37℃，反應(yīng)72 h，pH9緩沖液體系，濕菌體量為350 mg。最優(yōu)條件下，菌株對(1S,2R)構(gòu)型選擇性水解

3、e.e值為88.23％，轉(zhuǎn)化率為62.44％。
　　對CY-2進行了拆分底物譜的研究，制備了乙烯基環(huán)丙烷甲酸酯類衍生物以及不同的含酯鍵和氨基的化合物。在所選不同的11種化合物中，CY-2能夠選擇性水解其中的7種，其中制備獲得(1S,2R)-1-氨基-2-乙烯基環(huán)丙烷甲酸乙酯的e.e值達到99.60％。
　　對另一對底物具有拆分活性的菌株SQR-21進行了基因的挖掘，通過與活性酶Alcalase2.4L比對，利用大腸桿菌重組菌