水產(chǎn)品中磺胺二甲嘧啶間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA（ciELISA）檢測(cè)法的建立及初步應(yīng)用.pdf

1、本文分兩部分，第一部分將磺胺二甲嘧啶(SM2)與牛血清白蛋白(BSA)、人血清白蛋白(HSA)利用優(yōu)化的重氮化法進(jìn)行偶聯(lián)，分別作為免疫原及包被原，免疫原注射免疫新西蘭大白兔獲得多抗血清。第二部分建立了快速檢測(cè)水產(chǎn)品中殘留磺胺二甲嘧啶的間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法，并通過對(duì)比實(shí)驗(yàn)，對(duì)檢測(cè)過程中的各項(xiàng)條件進(jìn)行優(yōu)化。 研究方法和結(jié)果如下：用重氮化法將SM2與載體蛋白BSA偶聯(lián)制備人工合成抗原SM2-BSA，以此作為免疫原，同法合成包被抗原S

2、M2-HSA。選擇常規(guī)免疫程序，免疫2～3月齡新西蘭大白兔，獲得多抗SM2抗血清，結(jié)果表明抗血清特異性針對(duì)SM2。用間接ELISA法測(cè)定抗血清效價(jià)，同時(shí)，利用ELISA方法對(duì)抗血清進(jìn)行性質(zhì)鑒定，分別以HSA、SM2-HSA、BSA及SM2-BSA進(jìn)行包被，結(jié)果表明抗血清中存在抗SM2抗體，所獲得的抗血清基本符合實(shí)驗(yàn)要求。 用所制備的抗血清建立了間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA檢測(cè)SM2方法。利用對(duì)比實(shí)驗(yàn)，優(yōu)化ELISA工作條件，方陣滴定法確定

3、理想SM2-HSA包被抗原的濃度為1.0μg/ml，酶標(biāo)二抗(羊抗兔IgG-HRP)工作濃度為1：1000以及多抗(SM2-PcAb)血清的工作濃度為1：3200。以上述實(shí)驗(yàn)條件為基礎(chǔ)，以系列稀釋的SM2標(biāo)準(zhǔn)溶液作為檢測(cè)對(duì)象，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，擬和的線性回歸直線方程為y=88.323-18.013x，相關(guān)系數(shù)R2=0.9964，從標(biāo)準(zhǔn)曲線可以得知，此方法可測(cè)定的最適范圍為10～200μg/L，最小檢測(cè)限約為1.89μg/L。本實(shí)驗(yàn)所建立的E

4、LISA方法的精確度以批內(nèi)誤差(孔間差異)和批間誤差(板間差異)表示，結(jié)果表明孔間差異和板間平均差異分別為2.56％和5.14％，這表明方法精確度較好。添加回收率實(shí)驗(yàn)測(cè)得凡納濱對(duì)蝦肌肉樣本和牙鲆肌肉均回收率為90.98％±3.32％和90.02％±2.68％在可測(cè)定濃度范圍內(nèi)，磺胺二甲嘧啶(SM2)抗血清與磺胺甲噁唑、氯霉素、紅霉素、恩諾沙星、甲氧芐啶、呋喃唑酮等可能會(huì)因同時(shí)使用而導(dǎo)致共同殘留的抗微生物藥物未顯示免疫交叉反應(yīng)性，與結(jié)構(gòu)相