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1、目的:探索DDAVP聯(lián)合IL-4對(duì)RAW264.7細(xì)胞系(小鼠單核巨噬瘤細(xì)胞)LPCATmRNA和PAF-AH mRNA的表達(dá)影響。
方法:本實(shí)驗(yàn)共分為四組,即RAW264.7細(xì)胞系接受4種不同的培養(yǎng)方法,共培養(yǎng)12.5小時(shí),然后提取細(xì)胞總mRNA。IL-4+DDAVP組:先用含IL-4(10 ng/ml)的高糖 DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng) RAW264.7細(xì)胞12小時(shí),然后用含 DDAVP(100ng/ml)的高糖DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)
2、30min,提取細(xì)胞總mRNA。DDAVP組:先用高糖DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)RAW264.7細(xì)胞12小時(shí),然后用含DDAVP(100ng/ml)的高糖DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)30min,提取細(xì)胞總mRNA。IL-4組:先用含有IL-4(10 ng/ml)的高糖DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)RAW264.7細(xì)胞12.5小時(shí)后,然后提取細(xì)胞總mRNA??瞻讓?duì)照組:先用高糖DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)RAW264.7細(xì)胞12.5小時(shí)后,提取細(xì)胞總mRNA。將各組mRNA逆轉(zhuǎn)
3、錄成cDNA,應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)細(xì)胞LPCAT mRNA和PAF-AH mRNA的表達(dá)水平。表達(dá)水平=(Etarget)CTcontrol-CTsample)/(Eref)CTcontrol-CTsample),CTcontrol為actin的擴(kuò)增循環(huán)數(shù), CTsample所測(cè)產(chǎn)物 PAF-AH、LPCAT mRNA的擴(kuò)增循環(huán)數(shù), Eref為 actin mRNA的擴(kuò)增效率,Etarget為所測(cè)產(chǎn)物PAF-AH、LPCAT mR
4、NA的擴(kuò)增效率。應(yīng)用SPSS17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,計(jì)算每組6個(gè)樣本的?±s,進(jìn)行方差分析,兩組間比較采用LSD t檢驗(yàn)以及Dunnett T3 t檢驗(yàn),P<0.05。
結(jié)果:四個(gè)實(shí)驗(yàn)組RAW264.7細(xì)胞LPCAT mRNA表達(dá)水平分別為:IL-4+DDAVP組為1.23±0.41,DDAVP組為0.77±0.35,IL-4組為0.95±0.42,空白對(duì)照組為0.70±0.23,方差分析結(jié)果為,F(xiàn)=2.58,方差齊,LPC
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