清熱、活血中藥調(diào)控TLR4信號干預(yù)AS大鼠模型及AMI熱毒證候病因的研究.pdf

1、本文主要從以下幾個部分展開論述:
　　第一部分 實驗研究一脂多糖慢性炎癥刺激對大鼠AS模型的影響
　　目的:
　　本部分主要探討反復(fù)肌肉注射脂多糖誘導(dǎo)慢性炎癥反應(yīng)對大鼠AS模型形成的影響及其可能的機制。在高脂飲食與腹腔注射維生素D3的傳統(tǒng)AS大鼠模型基礎(chǔ)上，通過定期肌肉注射不同劑量脂多糖模擬慢性感染性炎癥過程，以三因素強化干預(yù)方式建立大鼠AS模型，觀察脂多糖對AS大鼠主動脈斑塊形成的影響以及血脂水平、炎癥因子的變化，探

2、討一種快速、穩(wěn)定、經(jīng)濟AS大鼠造模方式及其相關(guān)機制。
　　方法:
　　本實驗通過定期肌肉注射脂多糖的方法在高脂飲食復(fù)合腹腔注射維生素D3的大鼠體內(nèi)誘導(dǎo)一個持續(xù)性的慢性感染性炎癥反應(yīng)，以促進大鼠主動脈AS病變。根據(jù)處理因素不同分為4個組，每組8只大鼠（雄性SD大鼠，SPF級，180g-220g），具體分組為空白對照組（普通飲食）、模型組（高脂飲食+腹腔注射維生素D3）、低劑量組（模型組造模基礎(chǔ)上+低劑量脂多糖注射）、高劑量組（

3、模型組造?；A(chǔ)上+高劑量脂多糖注射）。在第10周實驗結(jié)束后采用腹主動脈采血休克法處死動物留取標(biāo)本，采用ELISA法檢測血清TNF-α、IL-6水平;采用酶比色法檢測血脂CHOL、TG、HDL-C、LDL-C水平;胸主動脈標(biāo)本組織行HE染色并在光鏡下進行病理形態(tài)學(xué)觀察及積分評價。
　　結(jié)果:
　　1.干預(yù)組以及模型組較空白對照組血清CHOL、TG、LDL-C水平明顯升高（P＜0.05），提示高脂血癥大鼠模型建立。低劑量組與模型

4、組血脂水平差異不大，高劑量組與模型組相比，血清CHOL、LDL-C、TG水平明顯升高（P＜0.05）;
　　2.干預(yù)組以及模型組較空白對照血清TNF-a、IL-6水平明顯升高（P＜0.05），提示脂多糖刺激后大鼠機體處于慢性炎癥反應(yīng)狀態(tài)，在高脂復(fù)合腹腔注射維生素D3基礎(chǔ)上給予不同劑量內(nèi)毒素誘導(dǎo)可以誘導(dǎo)慢性炎癥反應(yīng)，提高血清TNF-a、IL-6等炎癥因子水平，以高劑量組誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)作用最為明顯（P＜0.05）;
　　3.主動脈

5、HE染色，模型組可見血管內(nèi)皮結(jié)構(gòu)紊亂，內(nèi)膜明顯增厚，主動脈壁節(jié)段性硬化斑塊，可見脂質(zhì)斑塊、泡沫樣細胞以及鈣質(zhì)沉積，斑塊向管腔內(nèi)突起形成狹窄。
　　結(jié)論:
　　1.高脂飲食+腹注維生素D3可使AS大鼠TC、TG、LDL-C水平升高，疊加不同劑量脂多糖注射的作用下可進一步協(xié)同提高TC、TG、LDL-C水平，以高劑量脂多糖組加重血脂代謝紊亂明顯。
　　2.高脂飲食+腹注維生素D3可使大鼠血清TNF-a、IL-6水平升高，脂多

6、糖刺激可加速這種炎癥反應(yīng)進程，進一步提高TNF-a、IL-6水平，以高劑量組效果最為明顯;
　　3.脂多糖促AS可能機制為促進炎癥反應(yīng)以及血脂代謝紊亂，炎癥細胞大量釋放激活后損傷血管內(nèi)皮以及形成泡沫細胞吞噬脂質(zhì)，加劇脂質(zhì)氧化代謝紊亂以及脂質(zhì)沉積從而進一步促進AS斑塊形成或斑塊不穩(wěn)定。
　　第二部分 實驗研究二清熱、活血中藥對AS大鼠的血脂、炎癥因子水平以及TLR4相關(guān)信號通路影響的實驗研究
　　目的:
　　通過高

7、脂飲食聯(lián)合維生素D3、脂多糖注射建立大鼠AS模型，選用清熱、活血中藥雙黃連、丹參多酚酸鹽注射液干預(yù)復(fù)合因素所致的大鼠AS模型，從血脂，IL-6、TNF-a、P-selectin，主動脈病理形態(tài)改變比較兩者的療效，同時從TLR4/MyD88/NF-κB信號通路探討雙黃連以及丹參多酚酸鹽干預(yù)AS的可能機制，為清熱、活血法治療AS及其相關(guān)疾病提供基礎(chǔ)依據(jù)。
　　方法:
　　SD雄性大鼠48只，SPF級，180-220g，試驗性喂養(yǎng)

8、3天后隨機分6組(n=8)，具體分組為丹參多酚酸鹽（丹多酚）低劑量組(20mg/kg)、丹多酚高劑量組(60mg/kg)、雙黃連低劑量組(750mg/kg)、雙黃連高劑量組(2250mg/kg)、模型對照組、空白對照組。
　　結(jié)果:
　　1.雙黃連、丹參多酚酸鹽注射液均能不同程度降低AS大鼠血脂水平，在CHOL、TG、LDL-C方面，高、低劑量的雙黃連以及丹參多酚酸鹽較模型組均有明顯下降（P＜0.05），低劑量丹參多酚酸鹽組

9、在降低TG水平方面優(yōu)于低劑量雙黃連組（P＜0.05）;高劑量丹參多酚酸鹽組降低LDL-C水平略優(yōu)于雙黃連組，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。
　　2.雙黃連、丹參多酚酸鹽注射液均能不同程度降低AS大鼠血清TNF-a、IL-6、P-selectin水平，在TNF-α水平方面，低劑量雙黃連、丹參多酚酸鹽組較模型組下調(diào)不明顯（P＞0.05），高劑量的雙黃連以及丹參多酚酸鹽組較模型組均有明顯下降(P＜0.05);
　　結(jié)論:

10、r>　　1.復(fù)合因素復(fù)制的AS大鼠模型中，TLR4、MyD88、NF-κβ蛋白表達升高， TNF-a、IL-6水平升高，提示高脂飲食以及脂多糖刺激通過激活TLR4信號，經(jīng)過MyD88依賴途徑激活NF-κβ蛋白促進下游炎癥因子釋放，從而促進動脈粥樣硬化;
　　2.雙黃連、丹參多酚酸鹽均能降低AS大鼠炎癥因子TNF-a、IL-6水平，減輕炎癥反應(yīng)抑制AS進展，丹參多酚酸鹽還可通過下調(diào)Ps進一步穩(wěn)定及延緩動脈粥樣硬化斑塊的進展;

11、　　3.雙黃連、丹參多酚酸均能降低AS大鼠模型血脂水平，其中丹參多酚酸鹽降低LDL-C、TG效果略優(yōu)于雙黃連注射液;
　　4.雙黃連、丹參多酚酸鹽通過不同程度干預(yù)TLR4/MyD88/NF-κβ信號通路從而抑制動脈粥樣硬化進程，穩(wěn)定動脈粥樣斑塊;
　　5.丹參多酚酸鹽在抗大鼠AS進程以及促進斑塊穩(wěn)定上優(yōu)于雙黃連，這與丹參多酚酸鹽在降低TG、LDL-C水平，抑制血小板活化Ps的方面略優(yōu)于雙黃連注射液有關(guān)。
　　第三部分

12、臨床研究AMI熱毒證候病因探討的臨床回顧研究
　　目的:
　　本研究以冠心病急性心肌梗死患者(AMI，Acute myocardium infarction)為研究對象，對我院近幾年AMI患者的中醫(yī)證候，冠心病危險因素、理化檢查、血管病變情況、住院病情以及并發(fā)癥等進行調(diào)查分析，并重點對可能揭示AMI熱毒證候病因的要素進行單因素以及多因素Logistic篩選分析，為探討冠心病熱毒證病機、指導(dǎo)清熱、活血法治療冠心病提供臨床證據(jù)。

13、
　　方法:
　　單中心、回顧性調(diào)查方法，以符合納入標(biāo)準的的患者為研究對象，設(shè)計《冠心病急性心肌梗死患者證候與病情調(diào)查表》對研究對象的中醫(yī)證候、冠心病危險因素、理化檢查、住院病情等資料進行收集整理，重點對可能揭示AMI熱毒證候病因的要素進行單因素以及多因素Logistic回歸分析進篩選。
　　結(jié)果:
　　1.本研究中總共納入322例研究對象。AMI中醫(yī)證型以實證，虛實夾雜為主，證候分布頻次以血瘀、熱毒、痰濁、氣滯

14、等實證為主，單純以某一病理因素為主的實證證型比例較少，實證之間多有兼夾，其中以熱毒血瘀、痰瘀互結(jié)兩者在實證中所占比例最高;在虛實夾雜證中，以血瘀、痰濁兼夾氣虛證多見，熱毒證組在本研究中的AMI患者中所占的比例為42.20％(136例)，非熱毒組所占的比例為57.8％(186例)。
　　2.本研究中，男性是AMI的高發(fā)人群，比例高達82.9％，心肌梗死中吸煙人群占37.2％，合并高血壓病史、糖尿病病史、高脂血癥、心腦血管家族史比例分

15、別為51.8％、36.6％、64.9％、12.4％，進行單因素分析發(fā)現(xiàn)，AMI熱毒證患者多為吸煙、辛辣厚味飲食、糖尿病、高脂血癥多重心血管危險因素聚集人群（P＜0.05），進行多因素logistic回歸分析發(fā)現(xiàn)，吸煙、低密度脂蛋白、甘油三酯三個因子是預(yù)測AMI熱毒證候病因的獨立要素，OR值分別為1.755、1.637、1.483。
　　3.本研究中AMI熱毒證與非熱毒證病情以及預(yù)后方面，在病變血管數(shù)上，熱毒組的三支血管病變數(shù)目以及

16、平均病變血管數(shù)目較非熱毒組多（P＜0.05），在PCI術(shù)后并發(fā)癥與合并癥方面:泵功能水平、低血壓狀態(tài)、機械并發(fā)癥、肺部感染的組間分布未見明顯差異（P＞0.05），在住院期間死亡的終點事件上非熱毒證組(4.3％)高于熱毒證組(1.5％)，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義，在惡性心律失常的發(fā)生率，非熱毒證組高于熱毒證組(P＜0.05)，這也是非熱毒證組死亡率稍高于熱毒證組的主要原因;無創(chuàng)心功能評估方面，在左心室射血分數(shù)、左心室舒張末容積指標(biāo)上，熱毒證組均

17、差于非熱毒證組（P＜0.01），提示冠心病急性心肌梗死熱毒證患者遠期預(yù)后可能較差，發(fā)生心腦血管不良事件可能性更大，具體結(jié)果需要完善隨訪調(diào)查研究以進一步得出嚴謹結(jié)論。
　　結(jié)論:
　　AMI中醫(yī)證型以實證，虛實夾雜為主，證候分布頻次以血瘀、熱毒、痰濁等實證為主;AMI熱毒證候患者為吸煙、辛辣厚味飲食、糖尿病、高脂血癥多重心血管危險因素聚集人群，其中吸煙、低密度脂蛋白、甘油三酯三個因子是AMI熱毒證候病因的獨立要素，AMI熱毒證