乳品中金黃色葡萄球菌腸毒素A的免疫磁珠富集與量子點(diǎn)標(biāo)記檢測(cè).pdf

1、金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)是一種常見(jiàn)的食源性致病菌，易于在含有豐富蛋白質(zhì)和水分以及淀粉含量高的食品中快速繁殖，其產(chǎn)生的金黃色葡萄球菌腸毒素(Staphylococcal enterotoxin，SE)又是其重要的致病因子。為了滿足食品中致病微生物特異、快速地檢出與監(jiān)測(cè)的要求。本論文將納米磁珠和量子點(diǎn)與傳統(tǒng)的免疫方法相結(jié)合，利用磁珠的富集作用與量子點(diǎn)的標(biāo)記，研究出高特異性、高靈敏度的檢測(cè)平臺(tái)。研究結(jié)論如下

2、:
　　1安徽不同地區(qū)奶牛場(chǎng)牛奶中金黃色葡萄球菌及其腸毒素污染狀況評(píng)估從安徽省不同地區(qū)的30所奶牛場(chǎng)采集乳樣，進(jìn)行乳源性金黃色葡萄球菌的分離與生化鑒定，并采用PCR技術(shù)對(duì)分離出的菌株進(jìn)行金黃色葡萄球菌腸毒素血清型鑒定。通過(guò)對(duì)各個(gè)基因型進(jìn)行分類(lèi)比較后得出:乳樣中共分離出5株金黃色葡萄球菌，占總比例的16.7％，血清型主要為A、C型，屬于中度污染。
　　2乳源性金黃色葡萄球菌腸毒素A的間接ELISA檢測(cè)根據(jù)已獲得的評(píng)估結(jié)果，從乳

3、樣中分離出金黃色葡萄球菌腸毒素A。經(jīng)純化鑒定后，利用其作為免疫原，對(duì)獺兔進(jìn)行常規(guī)的免疫注射，獲得較高純度的金黃色葡萄球菌腸毒素特異性抗血清后，建立乳源金黃色葡萄球菌腸毒素間接ELISA檢測(cè)方法。其線性檢測(cè)范圍為1-103 ng/mL，回收率在98.9861％-103.3475％之間，可用于實(shí)際測(cè)量。
　　3金黃色葡萄球菌腸毒素A多克隆抗體免疫磁珠的制備利用油酸法獲得分散性好、羧基化、粒徑為10nm左右的磁性納米粒子，并進(jìn)一步用ED

4、C法活化。然后，將獲得的金黃色葡萄球菌腸毒素抗體與納米磁珠進(jìn)行偶聯(lián)，制備免疫磁珠，在抗體濃度在2 mg/mL時(shí)能獲得最大固化率。
　　4羧基熒光量子點(diǎn)的制備及其與抗體偶聯(lián)條件的篩選通過(guò)控制回流反應(yīng)時(shí)間在4h，反應(yīng)體系pH值在10，制備出熒光強(qiáng)度較高，光穩(wěn)定性好的羧基CdSe量子點(diǎn)，并對(duì)其熒光性能進(jìn)行表征。用EDC法活化量子點(diǎn)并使其與抗體偶聯(lián)，得到具有量子點(diǎn)標(biāo)記的金黃色葡萄球菌腸毒素特異性抗血清。
　　5金黃色葡萄球菌腸毒素A