葡萄糖氧化酶和辣根過(guò)氧化物酶共固定化催化手性苯甲亞砜的合成研究.pdf

1、葡萄糖氧化酶（GOX）和辣根過(guò)氧化物酶（HRP）是常用的兩種酶，前者多提取自黑曲霉發(fā)酵產(chǎn)物，而后者則來(lái)自天然植物辣根，兩種酶在很多領(lǐng)域都有極為廣泛的應(yīng)用。本文對(duì)這兩種酶的共固定化條件以及共固定化酶的性質(zhì)進(jìn)行了研究，并對(duì)共固定化酶（HRP是主酶，GOX提供H2O2是輔助酶）催化苯甲硫醚不對(duì)稱(chēng)氧化成苯甲亞砜的反應(yīng)展開(kāi)了研究。主要的實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下：
　　 （1）共固定的研究。選定了D380大孔陰離子交換樹(shù)脂和聚氨酯泡沫為固定化載體，采用

2、共價(jià)結(jié)合法將雙酶共固定于兩種載體。最終D380固定化酶的總酶活力可達(dá)到56 U·g-1（載體），固定化酶活得率為13％；聚氨酯泡沫固定化酶的固定化酶活得率為44％，酶活力為313 U·g-1（載體）。
　　 （2）酶學(xué)性質(zhì)的研究。兩種共固定酶的最適pH都為7.0，pH穩(wěn)定性比游離酶得到了提高；固定化酶有較好的操作穩(wěn)定性，經(jīng)歷10次操作后，D380固定化酶仍保留79.1％的活性，而聚氨酯泡沫固定化酶則為87.4％；兩種固定化酶的最

3、適溫度為45℃，與25℃相比相對(duì)酶活力分別達(dá)到了132％和141％；固定化酶的熱力學(xué)穩(wěn)定性也得到了提高。
　　 （3）手性苯甲亞砜的合成。兩種固定化酶用于水-有機(jī)共溶體系將苯甲硫醚的選擇性氧化苯甲亞砜的研究結(jié)果表明，該反應(yīng)的產(chǎn)物（S）-苯甲亞砜對(duì)映體過(guò)量；游離酶無(wú)論在產(chǎn)物得率還是在產(chǎn)物ee值上都比固定化酶遜色不少；有機(jī)共溶劑以叔丁醇效果最好；苯甲硫醚的最適濃度為2.0 mM，葡萄糖最適濃度為5 mM；聚氨酯泡沫固定化酶的最適溫度