聚乙烯亞胺對辣根過氧化物酶與乳酸脫氫酶構(gòu)象和活性的影響.pdf

1、UDC碩士學(xué)位論文聚乙烯亞胺對辣根過氧化物酶與乳酸脫氫酶構(gòu)象和活性的影響莫君勇論文答辯日期2Q!魚生旦2晝旦學(xué)位授予El期2Q!魚生魚月2壘目聚乙烯亞胺對辣根過氧化物酶與乳酸脫氫酶構(gòu)象和活性的影響摘要近年來，聚乙烯亞胺(PEI)基因載體材料由于其良好的轉(zhuǎn)染效率而備受基因工程界的青睞，但其潛在的安全性理論依據(jù)尚不明確，尤其是對功能性蛋白(如酶)的影響機(jī)理還缺乏統(tǒng)一的認(rèn)識。本文運(yùn)用紫外吸收光譜、熒光光譜、圓二色譜等光譜學(xué)手段，酶促反應(yīng)動力學(xué)

2、方法以及ITC技術(shù)研究了聚乙烯亞胺對辣根過氧化物酶(珈沖)和乳酸脫氫酶(LDH)的構(gòu)象、催化活性、熱穩(wěn)定性以及酶促反應(yīng)動力學(xué)的影響，對PEI與兩種蛋白質(zhì)之間的相互作用機(jī)理進(jìn)行了探討，為PEI作為基因載體材料的安全性研究提供一定的理論依據(jù)。本研究結(jié)果如下：PEI對HRP的構(gòu)象和功能均有顯著影響。(1)PEI的存在主要影響蛋白質(zhì)分子的三級結(jié)構(gòu)，對蛋白質(zhì)的二級結(jié)構(gòu)影響程度有限，對于構(gòu)象的影響可能是PEI與HRP形成了復(fù)合物，引起肽鏈骨架發(fā)生變

3、化，色氨酸和酪氨酸殘基附近微區(qū)環(huán)境的疏水性及兩種氨基酸在極性環(huán)境中的暴露程度發(fā)生了改變；(2)PEI可以增強(qiáng)HRP在模擬生理溶液中的催化活性，同時其酶催化反應(yīng)動力學(xué)參數(shù)％和％默也發(fā)生了變化，但其耐高溫能力有所削弱；(3)根據(jù)ITC結(jié)果顯示PEI與HRP問的相互作用表現(xiàn)出顯著的熱效應(yīng)，PEI與HRP間相互作用過程中，第一步AHi0，ASlO，而第二步AH20，竭O，故PEI與HRP之間的相互作用主要由疏水作用力、氫鍵和范德華力起主導(dǎo)作用。