葛根芩連注射劑的制備及其質(zhì)量控制研究.pdf

1、葛根芩連湯是《傷寒論》中治療濕熱證的經(jīng)典方劑，具有解表清里，升清止痢之功效。目前，葛根芩連湯在人用藥領(lǐng)域已經(jīng)被制備成為多種劑型，如供口服的片劑、配方顆粒、滴丸、微丸及通過(guò)其他途徑給藥的巴布劑和結(jié)腸定位釋藥柱塞膠囊等。但在獸藥領(lǐng)域，除了傳統(tǒng)的湯劑和散劑外，很少有其他劑型的報(bào)道。為了開發(fā)臨床療效更為確實(shí)的葛根芩連復(fù)方制劑，本課題對(duì)葛根芩連注射劑的制備工藝及質(zhì)量控制開展研究，以豐富葛根芩連的制劑研究?jī)?nèi)容，為獸醫(yī)臨床提供新型的葛根芩連制劑。

2、r>　　 由于葛根芩連湯中有效成分己較為明確，本實(shí)驗(yàn)采用正交試驗(yàn)法，以提取液澄明度和葛根素、黃芩苷、鹽酸小檗堿的含量作為考察指標(biāo)，對(duì)葛根芩連湯的提取、精制方法進(jìn)行了選擇；用HP-β-CD、吐溫-80和丙二醇為輔料制備了葛根芩連注射劑，并用TLC和HPLC的方法對(duì)其進(jìn)行質(zhì)量控制，結(jié)果表明：
　　 1.葛根芩連注射劑的最佳提取方法為葛根、黃芩、甘草共同煎煮，黃連單獨(dú)煎煮；提取條件均為11倍量的水浸泡、煎煮2次、每次1.5小時(shí)。其精

3、制方法為分別對(duì)合液和黃連單提液采用80％的乙醇沉淀一次。
　　 2.葛根芩連注射劑的成型工藝為：在兩種提取液中分別加4％的HP-β-CD，于80℃下攪拌2h后合并，再加入1.2％的吐溫-80和30％的丙二醇，純水定容至1000ml，于40C放置48h后取出過(guò)濾灌封，10ml/瓶，煮沸滅菌30min即得。
　　 3.對(duì)葛根芩連注射劑的質(zhì)量控制方法進(jìn)行了研究，建立了葛根芩連注射劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。采用TLC法對(duì)其有效成分進(jìn)行鑒別：

4、以氯仿一甲醇一水(5：1.5：0.25)為展開劑，UV254nm下鑒別葛根素；以乙酸乙酯-丙酮-正丁醇-冰醋酸-水(6：3：1：1：3)為展開劑，1％三氯化鐵乙醇溶液顯色鑒別黃芩苷；鹽酸小檗堿的鑒別采用正丁醇-冰醋酸-水(6：1：2)為展開劑，UV366nm下鑒別。結(jié)果顯示注射劑與葛根素、黃芩苷、鹽酸小檗堿的標(biāo)準(zhǔn)品在同一位置有相同斑點(diǎn)。有效成分含量的測(cè)定采用HPLC法，葛根素在0.7-3.5μg/ml范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)y=47303x

5、+2.4455x104，R2=0.9999(n=5)，回收率為96％(RSD=1.1)；黃芩苷在4.3-12.9μg/ml范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系，y=33471x+2.5156x105，R2=0.9999(n=5)，回收率為95.6％(RSD=1.2)；鹽酸小檗堿在4.0-20.0μg/ml范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系，y=12012x+2.6244x105，R2=0.9999(n=5)，回收率為96.4％(RSD=0.9)。有效成分的含量控

6、制為：葛根素大于2.086mg/ml，黃芩苷大于2.573mg/ml，鹽酸小檗堿大于6.836mg/ml。
　　 4.體外抑菌初步考察結(jié)果顯示：葛根芩連注射劑對(duì)金黃色葡萄球菌、沙門氏菌、大腸桿菌均有抑制作用，其MIC值分別為14.125μg/ml、113μg/ml、226μg/ml，抑菌效果強(qiáng)于葛根、黃芩、黃連單味藥提取液。
　　 葛根芩連注射劑制備工藝合理、有效成分含量穩(wěn)定、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)可控、體外抑菌效果優(yōu)于葛根、黃芩、黃