注射劑滅菌工藝

1、滅菌工藝驗(yàn)證的必要性,滅菌安全相關(guān)的藥害事件 美國：1971年3月，7個(gè)州8家醫(yī)院發(fā)生了405起敗血癥 中國：2006年8月，“欣弗”事件，涉及十幾個(gè)省，160多起嚴(yán)重不良反應(yīng)，8人死亡 注：引發(fā)藥害事件的產(chǎn)品均通過了無菌檢查,滅菌工藝驗(yàn)證的必要性,無菌檢驗(yàn)的局限性一：無菌的定義理論上：無菌＝?jīng)]有任何活的微生物實(shí)際上：無法證明產(chǎn)品中沒有活微生物存在無法對整批產(chǎn)品進(jìn)行100%

2、檢驗(yàn)檢驗(yàn)的結(jié)果只是一個(gè)基于“可能性”的判斷無菌檢驗(yàn)用培養(yǎng)基有其局限性只進(jìn)行細(xì)菌和真菌的檢驗(yàn)對結(jié)果的判定是基于“是否在培養(yǎng)基中生長”培養(yǎng)條件（如溫度和時(shí)間）是有限的我們的工作環(huán)境及操作是在相對無菌的狀態(tài),滅菌工藝驗(yàn)證的必要性,無菌檢驗(yàn)的局限性二：　　　 產(chǎn)品污染率、無菌檢查抽樣量和無菌檢查 “通過”率，可以用如下數(shù)學(xué)公式表示： P=(1-q)n q：產(chǎn)品污染率　　 P：無菌檢查通過

3、率　　　n：無菌檢查抽樣量　　　按照藥典規(guī)定的２０瓶抽樣量，假設(shè)該批產(chǎn)品的污染率為１％，則該批產(chǎn)品“通過”無菌檢查的概率為８２％,滅菌工藝驗(yàn)證的必要性,我們看一下，當(dāng)固定污染率為0.1%，抽樣20瓶時(shí)，通過無菌檢查的通過率：(1-0.001)20=98.0%檢出染菌的概率為2.0%抽樣1000瓶時(shí)，通過無菌檢查的通過率：(1-0.001)1000=36.7%檢出染菌的概率為63.3%抽樣3000瓶時(shí)，通過無菌檢查的通過率

4、：(1-0.001) 3000=4.97%檢出染菌的概率為95.03%,滅菌工藝驗(yàn)證的必要性,共識－－無菌檢查合格不能得出產(chǎn)品無菌的結(jié)論　　　　　　滅菌產(chǎn)品的無菌保證不能依賴于最終產(chǎn)品的無菌檢驗(yàn)，而是取決于生產(chǎn)過程中采用合格的滅菌工藝、嚴(yán)格的GMP管理和良好的無菌保證體系　　　　　　滅菌工藝的驗(yàn)證是無菌保證的必要條件　　　　　　滅菌工藝經(jīng)過驗(yàn)證后，方可正式用于生產(chǎn),附：無菌產(chǎn)品檢測取樣的時(shí)機(jī)和位置,無菌灌裝產(chǎn)品批開始、

5、結(jié)束及重大故障和調(diào)整后最多24小時(shí)為一批 USP 每天灌裝的產(chǎn)品應(yīng)分別做無菌檢驗(yàn)最終滅菌產(chǎn)品從滅菌柜中最冷點(diǎn)取樣對經(jīng)不同滅菌柜滅菌的產(chǎn)品應(yīng)分別進(jìn)行無菌檢驗(yàn),滅菌工藝驗(yàn)證中的幾個(gè)常用術(shù)語,3,1. 無菌保證值SAL： 　　中國藥典、美國藥典、歐洲藥典都將最終滅菌產(chǎn)品的無菌保證水平規(guī)定為微生物污染概率不超過百萬分之一；采用無菌生產(chǎn)工藝的產(chǎn)品，其無菌保證水平為微生物污染概率不超過千分之一,4,2、D值： 在一溫度

6、下，殺滅90%微生物（或殘存率為10%）所需的滅菌時(shí)間。3、Z值： 降低一個(gè)lgD值所需升高的溫度，即滅菌時(shí)間減少到原來的1/10所需升高的溫度或在相同滅菌時(shí)間內(nèi)，殺滅99%的微生物所需提高的溫度。4、 F值： 在一定滅菌溫度（T）下給定的Z值所產(chǎn)生的滅菌效果與在參比溫度（T0）下給定的Z值所產(chǎn)生的滅菌效果相同時(shí)所相當(dāng)?shù)臅r(shí)間。F值以min為單位?！　∽ⅲ簠⒈葴囟?21℃時(shí)為F0,170 ℃時(shí)為FH。,

7、滅菌工藝驗(yàn)證中的幾個(gè)常用術(shù)語,滅菌工藝驗(yàn)證中的幾個(gè)常用術(shù)語,5、過度殺滅法 F0≥12 微生物殘存概率＜10-66、殘存概率法 8≤ F0 ＜12 微生物殘存概率＜10-67、 無菌生產(chǎn)工藝 無菌保證一般只能達(dá)到10-3水平,滅菌工藝驗(yàn)證中的幾個(gè)常用術(shù)語,8 滅菌率 指在某一溫度T(℃)下滅菌

8、lmin 所獲得的標(biāo)準(zhǔn)滅菌時(shí)間L L＝F0/FT＝D121℃/DT＝10(T－121)/Z9 標(biāo)準(zhǔn)滅菌時(shí)間 系滅菌過程賦予一個(gè)產(chǎn)品121℃下的 等效滅菌時(shí)間 F0 F0=FT×10(T－121)/Z=ΔtΣ10(T－121)/10,5,歐盟滅菌方法選擇的對策,歐盟1999年8月正式開始執(zhí)行滅菌方法選擇的決策樹 決策樹的作用是在考慮各種復(fù)雜因素的情況

9、下輔助選擇最佳的滅菌方法,6,溶液劑型產(chǎn)品滅菌方法選擇的決策樹,,產(chǎn)品是否可以在121℃濕熱滅菌15分鐘,產(chǎn)品是否可以濕熱滅菌F0≥8 分鐘，達(dá)到SAL ≤10-6,采用高壓滅菌鍋 121℃15分鐘,,,,,,,是,否,處方是否可以通過微生物滯留過濾器過濾,無菌配藥和灌封,采用濕熱滅菌 F0≥8 分鐘,除菌過濾和無菌工藝相結(jié)合,,,,是,否,,,,,是,否,,7,非溶液劑型、半固體或干粉產(chǎn)品滅菌方法選擇的決策樹,,產(chǎn)品

10、是否可以在160℃干熱滅菌120分鐘,產(chǎn)品是否可以在另外一種時(shí)間和溫度條件下標(biāo)準(zhǔn)周期干熱滅菌達(dá)到SAL ≤10-6,采用160℃干熱滅菌120分鐘,,,,,,,是,否,產(chǎn)品是否可以用其他非干熱方法滅菌，如電離輻射，吸收最小劑量≥ 25KGY,采用另一種替代時(shí)間和溫度條件下標(biāo)準(zhǔn)周期干熱滅菌達(dá)到SAL ≤10-6,,,,是,否,,產(chǎn)品是否可以使用經(jīng)過驗(yàn)證的稍低輻射劑量滅菌（參見ISO11137）,采用最小輻射吸收最小劑量≥ 25KGY進(jìn)行輻

11、射滅菌,,,,是,否,,處方是否可以通過微生物滯留過濾器過濾,采用經(jīng)過驗(yàn)證的輻射劑量滅菌,,,,是,否,,無菌配藥和灌封,除菌過濾和無菌工藝相結(jié)合,,,,是,否,,8,決策樹越往下，風(fēng)險(xiǎn)越大需要提供的必要證據(jù)越多,10,滅菌工藝驗(yàn)證要求,驗(yàn)證內(nèi)容： 空載熱分布 滿載熱分布 熱穿透試驗(yàn) 微生物

12、挑戰(zhàn)試驗(yàn)（殘存概率法）滅菌前微生物污染水平----數(shù)量和耐熱性 ----過程控制,找出冷點(diǎn)多個(gè)溫度探頭均勻/重點(diǎn)分布在腔室內(nèi)， 重復(fù)運(yùn)行代表性滅菌程序，記錄個(gè)點(diǎn)溫度 變化曲線，計(jì)算各點(diǎn)溫差 通過比較各點(diǎn)溫度與平均溫度的差異確定冷點(diǎn),11,空載熱分布試驗(yàn),找出裝載方式下的冷點(diǎn) 以空載試驗(yàn)結(jié)果為基礎(chǔ) 更接近實(shí)際情

13、況,12,滿載熱分布試驗(yàn),熱穿透試驗(yàn),測定產(chǎn)品實(shí)際溫度和F0值 以熱分布（空載、滿載）試驗(yàn)結(jié)果為基 礎(chǔ)，進(jìn)一步確定實(shí)際樣品（或模擬樣品） 的冷點(diǎn). 重要標(biāo)準(zhǔn) 冷點(diǎn)F0 －平均F0≤2min,13,,14,熱穿透試驗(yàn),注意： 同品種不同濃度——考察不同濃度對熱穿透的影響 不同包裝規(guī)格——進(jìn)行最大和最小包裝規(guī)格的試驗(yàn) 不同裝載量——進(jìn)行最小和最

14、大裝載量的試驗(yàn) 不同滅菌溫度——進(jìn)行最高溫度條件下的試驗(yàn),15,證明通過該工藝能殺滅一定污染量和D值的微生物 --生物指示劑 --根據(jù)D值計(jì)算接種量 --植入芽孢的產(chǎn)品放在冷點(diǎn)部位 --運(yùn)行滅菌程序后含芽孢的產(chǎn)品應(yīng)通過無菌檢查,微生物挑戰(zhàn)試驗(yàn),以上試驗(yàn)一般應(yīng)連續(xù)進(jìn)行三次,空載、滿載熱分布試驗(yàn)——考察滅菌設(shè)備的特性和狀況 　　熱穿透和微生物挑戰(zhàn)試驗(yàn)—

15、—考察滅菌設(shè)備在執(zhí)行特定滅菌工藝時(shí)賦予產(chǎn)品的F0值，以及對微生物孢子的實(shí)際殺滅效果。,滅菌前產(chǎn)品的微生物控制,監(jiān)控的原因①產(chǎn)品滅菌前微生物監(jiān)控是國際規(guī)范的要求：世界衛(wèi)生組織GMPl992 版第17.50 款規(guī)定，應(yīng)制定產(chǎn)品滅菌前微生物污染的控制標(biāo)準(zhǔn)，這一標(biāo)準(zhǔn)與所采用(滅菌)方法的有效性及熱原污染的風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)。②注射劑滅菌后的無菌保證值與滅菌前產(chǎn)品的微生物污染程度及污染菌的耐熱性有關(guān)，對滅菌前微生物污染的狀況進(jìn)行檢控是對產(chǎn)品作

16、無菌評價(jià)的先決條件。③控制滅菌前微生物污染的程度是控制產(chǎn)品熱原污染的重要手段。,滅菌前產(chǎn)品的微生物控制,監(jiān)控的標(biāo)準(zhǔn)　　 目前歐洲一些大容量注射劑生產(chǎn)公司采用的標(biāo)準(zhǔn)如下：①每100ml 藥液中污染菌不得超過100 個(gè)。②在設(shè)定的滅菌程序下，污染菌的耐熱性(即D 值)不導(dǎo)致滅菌后產(chǎn)品微生物污染的概率大于10－6。,滅菌前產(chǎn)品的微生物控制,監(jiān)控方法(1)取樣 　　　在正常生產(chǎn)過程中，從每批產(chǎn)品灌裝開始、中間及結(jié)尾各取一瓶

17、灌封好的產(chǎn)品作滅菌前微生物監(jiān)控檢查。應(yīng)當(dāng)使用事先滅菌并做好標(biāo)記的瓶子取樣。(2)試驗(yàn)方法　　?、傥廴舅綑z查：先用滅菌的5％吐溫充分濕潤0.45μm 濾膜，然后定量過濾藥液，將此濾膜移至營養(yǎng)瓊脂平板上，在30～35℃培養(yǎng)3～7 天，計(jì)數(shù)?！　　、谀蜔嵝詸z查：另用一張0.45μm 濾膜，經(jīng)滅菌的5％吐溫充分濕潤后，過濾生物負(fù)荷檢查所剩余的藥液樣品。將此濾膜轉(zhuǎn)移入裝有無菌的待監(jiān)測產(chǎn)品的試管中，在沸水浴上煮沸30min，然后在30～35

18、℃下在硫乙醇酸鹽肉湯中培養(yǎng)，觀察是否有耐熱菌生長。,滅菌前產(chǎn)品的微生物控制,當(dāng)污染水平超標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，應(yīng)對污染菌進(jìn)行鑒別，調(diào)查污染菌的來源并取相應(yīng)糾正措施。當(dāng)耐熱性檢查發(fā)現(xiàn)藥液存在耐熱菌污染時(shí)，應(yīng)測定污染菌的D 值或采用定時(shí)沸騰法將它和已知生物指示劑的D 值作比較，然后根據(jù)滅菌的F0 值及污染菌的耐熱性對產(chǎn)品無菌作出評價(jià)?！　　　∪绻?zé)岷髽悠返臋z測結(jié)果為不長菌，則說明產(chǎn)品中無耐熱孢子,滅菌器溫度均勻度的標(biāo)準(zhǔn),USP 24 在〈1211〉

19、中規(guī)定，干熱滅菌器在不低于250℃空載運(yùn)行時(shí)，腔室各點(diǎn)允許的溫差范圍在±15℃。 USP 24提到： 在121℃下滅菌時(shí)，各測溫點(diǎn)之間的溫差允許在±1℃之內(nèi)。JB20001－2003中規(guī)定：大、小容量注射劑滅菌器的熱分布試驗(yàn)中，冷點(diǎn)溫度與腔室平均溫度之差≤±1 ℃；熱穿透試驗(yàn)中，冷點(diǎn)F0與腔室平均F0之差≤2min.,干熱滅菌、除熱原的標(biāo)準(zhǔn),BP1993年版規(guī)定：　　　僅以滅菌為最終目的的干熱滅菌

20、系統(tǒng)，必須保證其最小的FH值大于170℃60min。干熱除熱原必須保證其暴露實(shí)際溫度和時(shí)間相當(dāng)于250℃30min。　　　說明： 250℃30min除熱原效應(yīng)FH＝900　中國藥典2005規(guī)定：　　　160~170 ℃ × 120min;　　　170~180 ℃×60min；　　　250 ℃ ×45min（可除熱原）　　　說明： 250 ℃ ×45min除熱原效應(yīng)FH＝1365。,隧

21、道式滅菌干燥機(jī)除熱原的標(biāo)準(zhǔn),口服液瓶灌裝聯(lián)動線隧道式滅菌干燥機(jī) JB20007.3－2004中規(guī)定： 口服液瓶、抗生素瓶在隧道高溫區(qū)300℃以上至少5min。除熱原效應(yīng)FH＝1276；安瓿隧道式滅菌干燥機(jī)JB20002.3－2004中規(guī)定：安瓿在隧道高溫區(qū)300℃以上至少4min。除熱原效應(yīng)FH＝1021；表冷式隧道干燥機(jī)標(biāo)準(zhǔn)：FH＝1365（與藥典接規(guī)）,說明,過去，很多人將流通蒸氣滅菌法誤認(rèn)為是終端滅菌法。其實(shí)流通蒸氣滅菌法

22、應(yīng)以無菌生產(chǎn)工藝（除菌過濾，嚴(yán)格控制與藥液接觸的設(shè)備、器具和環(huán)境的微生物污染水平等）為基礎(chǔ)，流通蒸氣加熱只是無菌生產(chǎn)工藝的補(bǔ)充手段，不計(jì)算F0，微生物殘存概率＜10-3 流通蒸氣100℃加熱30分鐘，相當(dāng)于F0值0.24,滅菌器驗(yàn)證過程中曾遇到的幾個(gè)問題,1、 濕熱滅菌柜腔室內(nèi)溫度上下分層　?。艢獠粡氐祝弧　。杷y堵塞。　　　以前，我們在杭州一家藥廠的一臺老式滅菌柜的驗(yàn)證過程中曾遇到過這個(gè)問題?！?

23、、隧道式烘箱溫度控制顯示與驗(yàn)證儀溫度差異很大　?。瓬y溫探頭質(zhì)量問題；　?。瓬y溫探頭位置（高度）?！　　∥覀冊诟魂栆患宜帍S驗(yàn)證時(shí)曾遇到過這個(gè)問題。,滅菌器驗(yàn)證過程中曾遇到的幾個(gè)問題,3、隧道式烘箱腔室溫度分布差異很大?。糠旨訜峁軗p壞；?。M(jìn)風(fēng)、回風(fēng)的調(diào)節(jié)問題?！　　≡趯幉ㄒ患宜帍S驗(yàn)證時(shí)曾遇到過這個(gè)問題。,國內(nèi)企業(yè)滅菌工藝驗(yàn)證常見缺陷,無包裝規(guī)格無裝載方式未對每一種產(chǎn)品每一種包裝規(guī)格的每一種裝載方式進(jìn)行驗(yàn)證采用留

24、點(diǎn)溫度計(jì)監(jiān)測溫度無溫度探頭校準(zhǔn)記錄驗(yàn)證的滅菌工藝與實(shí)際工藝不一致未驗(yàn)證最差滅菌條件僅針對生產(chǎn)線進(jìn)行驗(yàn)證，未結(jié)合產(chǎn)品進(jìn)行驗(yàn)證設(shè)定的驗(yàn)證合格標(biāo)準(zhǔn)達(dá)不到無菌保證水平（SAL）10-6,國內(nèi)企業(yè)滅菌工藝驗(yàn)證常見缺陷,生物指示劑使用不規(guī)范國內(nèi)缺乏某些無菌藥品生產(chǎn)必備的檢測儀器－－D值測定儀企業(yè)的微生物實(shí)驗(yàn)室能力薄弱－－缺乏專業(yè)人員－－缺乏菌種分離鑒別的條件和能力無菌生產(chǎn)工藝未進(jìn)行培養(yǎng)基灌裝和微生物截流量試驗(yàn),注射劑生產(chǎn)常見問

25、題問答,1、問：洗烘灌聯(lián)動線在正常運(yùn)行時(shí)，玻璃瓶通過隧道烘箱滅菌后即進(jìn)行灌裝，但當(dāng)灌裝機(jī)出現(xiàn)故障或不間斷檢修的情況下，受聯(lián)動線的限制，必然會導(dǎo)致隧道烘箱內(nèi)的一部分玻璃瓶將處于高溫區(qū)，長時(shí)間滯留時(shí)會不會對瓶本身產(chǎn)生影響？　　　答：要看什么材質(zhì)的，可以做驗(yàn)證‘，烘洗后做耐酸耐堿試驗(yàn)?！　　?2、問：熱風(fēng)循環(huán)烘箱溫度時(shí)有失控現(xiàn)象，如何解決？ 答：可以檢查一下溫度傳感器是否失靈，電磁閥是否工作正常：

26、一、更換溫度傳感器，二、更換溫度控制儀。,注射劑生產(chǎn)常見問題問答,3、問：玻璃瓶在隧道烘箱里冷爆的原因和風(fēng)速有關(guān)系嗎？ 答： 玻璃瓶爆裂，其原因就在于溫差或是外力擊打，此問題中的原因是溫差，可能是風(fēng)速的原因，就是說冷卻得不均衡，或是移動過程中接觸到低溫的物體，尤其是熱傳導(dǎo)較快的金屬物體。再有就是所用玻璃瓶的質(zhì)量不很好，建議選用正規(guī)廠家生產(chǎn)的。,注射劑生產(chǎn)常見問題問答,4、在對濕熱滅菌器進(jìn)行熱分布、熱穿透的驗(yàn)證時(shí)

27、，如果柜內(nèi)找到的冷點(diǎn)在3次驗(yàn)證中不同，該如何處理？　　答：一般來說，空載熱分布的冷點(diǎn)應(yīng)該是在確定的位置周圍，否則就可能是設(shè)備、壓力、空氣置換不完全、蒸汽質(zhì)量等原因引起?！　τ谘b載熱穿透，大容量注射劑（LVP，>100ml）冷點(diǎn)位于產(chǎn)品的幾何中心和沿縱軸位于產(chǎn)品的底部，但需要驗(yàn)證確認(rèn)。冷點(diǎn)的定位在小容量注射劑中并不典型，因?yàn)槿芤杭訜岬乃俾蕩缀跖c滅菌器相同?！　∵€有，容器的方向也會影響冷點(diǎn)的位置，當(dāng)容器旋轉(zhuǎn)或翻轉(zhuǎn)時(shí)，可能不存在

28、可辨別的冷點(diǎn)。　　如果裝載不變，容量相同，蒸汽穿透不存在阻隔等，冷點(diǎn)仍然無法重現(xiàn)，則應(yīng)檢查設(shè)備、工藝、壓力、蒸汽質(zhì)量等方面可能存在的不確定性。,注射劑生產(chǎn)常見問題問答,5、熱穿透試驗(yàn)中的模擬樣品是什么概念，是指實(shí)驗(yàn)室小批量樣品嗎？ 答：熱穿透試驗(yàn)中的模擬樣品是指熱穿透性能與真實(shí)樣品一致的樣品，不是實(shí)驗(yàn)室小批量樣品。,注射劑生產(chǎn)常見問題問答,6、請問滅菌前微生物污染水平和耐熱性（D值）的測試方法？

29、 答：微生物污染水平通常采用濾膜過濾法截留微生物，再將濾膜轉(zhuǎn)移到固體培養(yǎng)基表面，培養(yǎng)并作微生物計(jì)數(shù)。應(yīng)注意過濾的體積、截留微生物的數(shù)量，保證足夠的檢出率（足量的過濾量）和可計(jì)數(shù)性（截留的微生物太多就沒法計(jì)數(shù)了）。 每批產(chǎn)品都進(jìn)行的耐熱性測試并非D值測試，而是所謂沸騰試驗(yàn)－一種定性試驗(yàn)。將截留了微生物的濾膜放入裝有同種產(chǎn)品藥液的試管中，進(jìn)行水浴煮沸15分鐘或更長時(shí)間，對該藥液進(jìn)行無菌檢查，如陰性則通過，呈

30、陽性，說明污染菌是耐熱菌，則需要進(jìn)一步測D值。99%以上的檢品是非耐熱菌。 D值測定相當(dāng)復(fù)雜，請參考《藥品生產(chǎn)驗(yàn)證指南》（藍(lán)皮書，國家藥監(jiān)局編）第三篇第三章第一節(jié)，有詳細(xì)介紹。,附：D值測定法,生物指示劑耐熱性測定儀　　　在滅菌過程中形成矩形脈沖曲線，即升溫及降溫極快，能保持恒定的溫度，曝?zé)徇^程容易計(jì)時(shí)。假設(shè)條件　　　微生物存活數(shù)從N0到滅菌終點(diǎn)始終與曝?zé)釙r(shí)間呈線性關(guān)系（對數(shù)規(guī)則）。,方法一：不生長分?jǐn)?shù)法（

31、陰性分?jǐn)?shù)法）,①　最可能數(shù)測定法　　　將一組樣品（至少10個(gè)樣本）置于設(shè)定滅菌溫度下，加熱到設(shè)定時(shí)間后，分別作無菌檢查。當(dāng)滅菌溫度T為121℃時(shí)，可用下式計(jì)算D值DT＝F0/lgN0-lg[2.303lg(n/q)]式中：n――樣品總數(shù)　　　　q――曝?zé)崽幚砗鬅o菌樣品數(shù),方法一：不生長分?jǐn)?shù)法（陰性分?jǐn)?shù)法）,②　估算法　　　系列組（每組至少10個(gè)樣品），置于預(yù)定溫度下，按等差遞增的方式設(shè)置不同的曝?zé)釙r(shí)間，分別進(jìn)行熱處理，處理

32、后的樣品放入無菌液體中適宜溫度下培養(yǎng)，記錄每組樣品中沒有微生物生長的樣品數(shù)，按下表方式進(jìn)行排列,選擇從全部生長的最長曝?zé)釙r(shí)間組（B）到顯示完全不生長最短曝?zé)釙r(shí)間組（G）之間的數(shù)據(jù)計(jì)算D值。首先計(jì)算出孢子完全殺滅時(shí)間tt=tk-d/2-(d/10×∑f)　式中：tk――陰性分?jǐn)?shù)范圍下限（全部樣品不長菌所需的最短曝?zé)釙r(shí)間）　　　　d ――等差值,方法一：不生長分?jǐn)?shù)法（陰性分?jǐn)?shù)法）,然后根據(jù)下式計(jì)算D值D＝t/(lgN0+

33、0.2507)假設(shè)N0＝105，其它實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)如上表所示，則D值的計(jì)算為　　t＝15－2/2-（2/10×26）=8.8(min)　　D=8.8/(5+0.2507)=1.7(min),方法二：存活曲線法,測試兩個(gè)樣品（至少），在設(shè)定溫度下（如121℃）分別取兩個(gè)不同的曝?zé)釙r(shí)間，然后將熱處理后的樣品及對照樣品（未經(jīng)熱處理的樣品）采用平皿計(jì)數(shù)法或經(jīng)薄膜過濾并置于適當(dāng)培養(yǎng)基表面培養(yǎng)的方法對每個(gè)樣品中存活微生物進(jìn)行計(jì)數(shù)（NS

34、），將實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的平均值取常用對數(shù)（lg），對相應(yīng)的曝?zé)釙r(shí)間F0作圖，可得如圖所示的存活曲線,在存活曲線上，從微生物差值為一個(gè)對數(shù)單位的二個(gè)點(diǎn)分別作X軸和Y軸的平行線，在X軸上即可求得D值，也可用下面的公式計(jì)算D121℃＝F0/（lgN0－lgNS）舉例：D值測定中曝?zé)釙r(shí)間為5min,而N0＝105，NS＝102，則D121℃＝5/(lg105- lg102)=5/3=1.7(min),方法二：存活曲線法,從上圖中也可以看出，D值

35、為存活曲線斜率的負(fù)倒數(shù)（－1/K），因此D值可在存活曲線的直線段，用未加權(quán)最小二次線性回歸分析法按下式求得式中　u――曝?zé)釙r(shí)間　　　　y－－曝?zé)釛l件下存活菌落數(shù)的平均值　　　　n――所得初驗(yàn)數(shù)據(jù)的組數(shù),注射劑生產(chǎn)常見問題問答,7、對于選擇殘存概率法最終滅菌的產(chǎn)品，如果滅菌前每批檢測微生物限度，而微生物限度檢測時(shí)間為72小時(shí)，而實(shí)際連續(xù)生產(chǎn)的生產(chǎn)周期遠(yuǎn)遠(yuǎn)短于72小時(shí)，其檢測結(jié)果僅是對滅菌后產(chǎn)品無菌保證水平的參考嗎？　　答：顯然

36、滅菌前微生物含量檢查的結(jié)果遠(yuǎn)遠(yuǎn)滯后于生產(chǎn)過程，其目的不是用于對當(dāng)批產(chǎn)品的中間控制。該檢查的意義主要有兩項(xiàng)： 第一，用于評價(jià)該批產(chǎn)品的無菌保證水平； 第二，長期積累了多批滅菌前微生物含量的數(shù)據(jù)后，可以對生產(chǎn)系統(tǒng)在滅菌前的各工藝步驟的微生物污染狀況作整體的評估，從而指示該生產(chǎn)體系是否有效地將微生物污染控制在很好的水平，是否需要進(jìn)行改進(jìn)等。,注射劑生產(chǎn)常見問題問答,8、請問微生物種類、數(shù)量研究的方法

37、？所需的設(shè)備？如果采用殘存概率法，是否在生產(chǎn)過程中必須對微生物水平進(jìn)行測定？ 答：微生物污染的程度－即數(shù)量的檢查可以按照藥典收載的微生物限度檢查方法進(jìn)行； 微生物的種類可以從以下幾方面依次展開： 1）通過肉眼觀察菌落形態(tài)； 2）鏡檢形態(tài)和運(yùn)動性； 3）一般生化試驗(yàn)：革蘭氏染色或3％KOH試驗(yàn)； 4）生化鑒定（

38、即API試驗(yàn)）鑒別到種。 采用殘存概率法時(shí)，應(yīng)該檢測產(chǎn)品滅菌前微生物污染水平，包括污染菌的煮沸試驗(yàn)（如100℃，15分鐘）和微生物計(jì)數(shù)。,注射劑生產(chǎn)常見問題問答,9、過度殺滅法是否確定不需進(jìn)行微生物挑戰(zhàn)試驗(yàn)？ 答：過度殺滅法的內(nèi)涵是產(chǎn)品中的微生物下降12個(gè)對數(shù)，微生物挑戰(zhàn)試驗(yàn)是證明微生物的殘存概率不大于10-6，故過度殺滅法可不進(jìn)行微生物挑戰(zhàn)試驗(yàn)。,注射劑生產(chǎn)常見問題問答,10、如何進(jìn)行藥液儲存

39、周期驗(yàn)證，儲存周期起點(diǎn)、終點(diǎn)如何確定，使配制完成后→滅菌前，還是過濾后→滅菌前，取樣點(diǎn)如何設(shè)置，檢驗(yàn)方法及合格判定標(biāo)準(zhǔn)如何確定？　　 答：進(jìn)行藥液儲存時(shí)間驗(yàn)證的目的是為了確保藥液的微生物水平控制在下道工藝要求范圍內(nèi)并確保對產(chǎn)品的無菌性和內(nèi)毒素等質(zhì)量指標(biāo)無不良影響。一般來講，配液完成后到無菌過濾前，或過濾完成后到滅菌前（終端滅菌產(chǎn)品）是考察的重點(diǎn)，方法和標(biāo)準(zhǔn)需要根據(jù)自己產(chǎn)品的工藝特點(diǎn)確定。,討論1:　隧道式滅菌干燥機(jī)

40、的傳輸速度,提請注意審核一下你們注射劑工藝規(guī)程中，是否規(guī)定的干熱滅菌干燥機(jī)傳輸帶的運(yùn)行速度？沒有制定傳輸帶的運(yùn)行速度，滅菌除熱原的效果（時(shí)間）靠什么保證？再請大家審核一下你們以前做的驗(yàn)證方案或驗(yàn)證報(bào)告（包括委托專業(yè)公司進(jìn)行的驗(yàn)證），里面有沒有體現(xiàn)出“傳輸速度”這個(gè)關(guān)鍵的驗(yàn)證點(diǎn)呢？倘若這個(gè)點(diǎn)沒有出現(xiàn)在方案或報(bào)告中，你驗(yàn)證的是什么呢？,討論2：裝載熱分布和熱穿透合做試驗(yàn)的分析,濕熱滅菌柜驗(yàn)證時(shí)，裝載熱分布和熱穿透試驗(yàn)?zāi)闶欠珠_做還合在一起

41、做的呢？當(dāng)你合在一起做時(shí)候，哪些探頭是用于熱分布的，哪些是用于熱穿透的，你標(biāo)注清楚了嗎？你合在一起做的目的描述了嗎？對兩組數(shù)據(jù)分析了嗎？濕熱滅菌柜的測溫探頭的裝置方式，不同企業(yè)有時(shí)是不同的，有的是暴露在滅菌環(huán)境中，測空氣的溫度，有的則裝在模擬產(chǎn)品中，測滅菌產(chǎn)品內(nèi)部的溫度。也就是說，有的和熱分布是一致的，有的和熱穿透試驗(yàn)是一致的，不同的安裝方式對于你制定滅菌程序時(shí)的影響你考慮了嗎？,討論3：接二連三的注射劑產(chǎn)品出事提醒些什么,齊二藥事件

42、　　　不法商人王桂平偽造藥品生產(chǎn)許可證等證件，于２００５年１０月將工業(yè)原料二甘醇假冒藥用輔料丙二醇出售給齊二藥?；?yàn)室主任陳桂芬等人未將檢測圖譜與“藥用標(biāo)準(zhǔn)丙二醇圖譜”進(jìn)行對比鑒別，并在發(fā)現(xiàn)檢驗(yàn)樣品“相對密度值”與標(biāo)準(zhǔn)嚴(yán)重不符的情況下，將其改為正常值，簽發(fā)合格證，致使假藥“亮菌甲素注射液”出籠并造成１１名患者使用該產(chǎn)品后出現(xiàn)急性腎功能衰竭并死亡。,討論3：接二連三的注射劑產(chǎn)品出事提醒些什么,“欣弗”事件　　　安徽華源生物藥業(yè)有限公司

43、2006年6月至7月生產(chǎn)的克林霉素磷酸酯葡萄糖注射液未按批準(zhǔn)的工藝參數(shù)滅菌，降低滅菌溫度，縮短滅菌時(shí)間，增加滅菌柜裝載量，影響了滅菌效果。經(jīng)中國藥品生物制品檢定所對相關(guān)樣品進(jìn)行檢驗(yàn)，結(jié)果表明，無菌檢查和熱原檢查不符合規(guī)定。工藝參數(shù)不得任意進(jìn)行更改,討論3：接二連三的注射劑產(chǎn)品出事提醒些什么,甲氨蝶呤事件 上海華聯(lián)制藥廠在生產(chǎn)過程中，現(xiàn)場操作人員將硫酸長春新堿尾液混于注射用甲氨蝶呤及鹽酸阿糖胞苷等批號藥品中，導(dǎo)致了多個(gè)批次的

44、藥品被硫酸長春新堿污染，造成重大的藥品生產(chǎn)質(zhì)量責(zé)任事故標(biāo)識、清場、工作態(tài)度、培訓(xùn),討論3：接二連三的注射劑產(chǎn)品出事提醒些什么,完達(dá)山刺五加注射液事件 　　　2008年7月1日，昆明特大暴雨造成庫存的刺五加注射液被雨水浸泡。完達(dá)山藥業(yè)公司云南銷售人員張某從完達(dá)山藥業(yè)公司調(diào)來包裝標(biāo)簽，更換后銷售。 正是這些被雨水浸泡過的產(chǎn)品，致使3名使用該藥品的患者死亡。 　　　二次污染、貯存條件、標(biāo)簽管理,附件1：　　滅菌器驗(yàn)證流程,1. 首次

45、驗(yàn)證　　 　　　　2. 偏差管理、變更控制 3. 再 驗(yàn) 證　　 　4. 階段性的風(fēng)險(xiǎn)評估,首次驗(yàn)證,用戶要求 URS（ User Requirement Specification ）　　 　　 ︱功能標(biāo)準(zhǔn)　FDS（ Functional Design Specification ︱設(shè)計(jì)確認(rèn)　D Q （ Design Qualification ） 　　 ︱工廠測試　F

46、AT（ Factory Acceptance Test ） ︱現(xiàn)場測試 SAT（ Site Acceptance Test ） ︱安裝確認(rèn)　I Q（ Installation Qualification ） ︱運(yùn)行確認(rèn) O Q（ Operational Qualification ） ︱性能確認(rèn) P Q（ Performance Qua

47、lification ）,首次驗(yàn)證－－用戶要求 URS,1. 工藝描述 (產(chǎn)品,部件) 生產(chǎn)流程介紹、滅菌的工藝 、產(chǎn)品特性, 物料的特性、產(chǎn)量、滅菌的效果達(dá)到要求, (Temp & Time; FO)等2. 滅菌柜驗(yàn)證的主要合格標(biāo)準(zhǔn)3. 一些指南的要求 4. 環(huán)境和安全要求5. 技術(shù)要求及布局要求機(jī)械部分的要求電氣部分的要求控制系統(tǒng)的要求6. 介質(zhì)的要求,URS 的關(guān)注點(diǎn),對于自己列出的

48、要求, 首先要自己判斷是否理解，是否合理由于設(shè)備大都是按標(biāo)準(zhǔn)設(shè)計(jì)的, 必須確保供應(yīng)商對URS仔細(xì)閱讀,首次驗(yàn)證－－功能標(biāo)準(zhǔn) FDS,由供應(yīng)商提供設(shè)備控制系統(tǒng)對驗(yàn)證的設(shè)計(jì)也是FDS的一部分　　　　 大多設(shè)備的FDS都是針對型號編寫的, 可以要求供應(yīng)商提供FDS/URS 符合表,首次驗(yàn)證－－設(shè)計(jì)確認(rèn) DQ,DQ 的參考資料: URS/ FDS/ 圖紙/ 法規(guī)確保設(shè)計(jì)滿足URS和法規(guī)的要求對于FDS 和URS 的不符合項(xiàng)

49、,需要作出決定是整改還是接受 從DQ開始,所有的文件變更都是GMP檢查的范圍!,首次驗(yàn)證－－工廠測試 FAT,在出廠之前對設(shè)備進(jìn)行整體的測試對制造文件的詳細(xì)檢查 材料(材質(zhì)證明) 焊接檢查 壓力容器證書對于IQ/OQ 中一些無法檢查的項(xiàng)目,需要安排在FAT中進(jìn)行，如：一些控制功能的模擬, 一些挑戰(zhàn)實(shí)驗(yàn),首次驗(yàn)證－－現(xiàn)場測試 SAT,設(shè)備在現(xiàn)場組裝完成后進(jìn)行的整體測試確保系統(tǒng)能按設(shè)計(jì)要求正常運(yùn)轉(zhuǎn)

50、是對員工進(jìn)行培訓(xùn)的機(jī)會開始準(zhǔn)備SOP可以作為IQ 的準(zhǔn)備,首次驗(yàn)證－－安裝確認(rèn) IQ,文件的檢查儀表與管道的檢查介質(zhì)的檢查設(shè)備主要特性及安全特性的檢查,首次驗(yàn)證－－運(yùn)行確認(rèn)OQ,儀表的校準(zhǔn)（控制用儀表和記錄用儀表）LOOP 測試安全檢查報(bào)警測試單項(xiàng)功能測試整體性能測試 程序運(yùn)行電子記錄和電子簽名的測試,首次驗(yàn)證－－性能確認(rèn) PQ,1 前提條件滅菌柜 IQ、OQ 完成程序及裝載的預(yù)測試完成純蒸汽的PQ 第

51、一第二階段完成壓縮空氣的PQ完成驗(yàn)證儀器的確認(rèn)完成SOP 完成, 所用的程序和裝載方式確定人員培訓(xùn)完成所有的測試材料準(zhǔn)備完畢,首次驗(yàn)證－－性能確認(rèn) PQ,2. PQ 中的重要測試項(xiàng)目空腔體溫度分布最小裝載的溫度分布最大裝載的溫度分布中間裝載的溫度分布 (根據(jù)實(shí)際情況)微生物挑戰(zhàn)實(shí)驗(yàn)泄漏率測試Air Detector 測試 對于每一種測試, 重復(fù)三次,滅菌驗(yàn)證的一些基本要求,驗(yàn)證用儀器必須提供校準(zhǔn)證書熱電偶/電

52、阻在使用前和使用后都必須進(jìn)行校準(zhǔn)對于大容量的瓶子,熱電偶/電阻在瓶子中的位置必須進(jìn)行確認(rèn)如果采用替代物質(zhì)進(jìn)行PQ, 必須進(jìn)行等同性測試必須確定產(chǎn)品滅菌的接受標(biāo)準(zhǔn)F0值的范圍對于濕熱滅菌柜,需要考慮平衡時(shí)間對于收集的數(shù)據(jù),必須及時(shí)進(jìn)行分析,總結(jié),偏差管理和變更控制,對于驗(yàn)證過程中出現(xiàn)的偏差必須遵循偏差管理的流程如果需要變更, 則還需要遵循變更的流程,再驗(yàn)證,滅菌的程序和裝載發(fā)生變化后,必須進(jìn)行再驗(yàn)證滅菌柜使用一定周期后,必

53、須對程序和裝載進(jìn)行再次確認(rèn). 通常為一年再驗(yàn)證的策略是列出程序和裝載的列表, 有選擇地對關(guān)鍵裝載進(jìn)行再驗(yàn)證,風(fēng)險(xiǎn)評估,幾個(gè)術(shù)語： 風(fēng)險(xiǎn)：是危害發(fā)生的可能性和嚴(yán)重性的組合。風(fēng)險(xiǎn)管理：即系統(tǒng)性的應(yīng)用管理方針、程序?qū)崿F(xiàn)對 目標(biāo)、任務(wù)的風(fēng)險(xiǎn)分析、評價(jià)和控制。風(fēng)險(xiǎn)分析：運(yùn)用有用的信息和工具，對危險(xiǎn)進(jìn)行識 別、評價(jià)。風(fēng)險(xiǎn)控制：即制定減小風(fēng)險(xiǎn)的計(jì)劃和對風(fēng)險(xiǎn)減少計(jì)

54、 劃的執(zhí)行，及執(zhí)行后結(jié)果的評價(jià)。,風(fēng)險(xiǎn)管理,有什么風(fēng)險(xiǎn)?從哪兒來? 對什么有影響?嚴(yán)重程度怎樣? 我們?nèi)绾螒?yīng)對?,風(fēng)險(xiǎn)管理的應(yīng)用程序,風(fēng)險(xiǎn)管理過程,風(fēng)險(xiǎn)評估,對危害源的鑒定和對接觸這些危害源造成的風(fēng)險(xiǎn)的分析和評估,1）什么時(shí)候出錯(cuò)2）出錯(cuò)的可能性有多大3）結(jié)果是什么（嚴(yán)重性）,風(fēng)險(xiǎn)控制,制訂降低和/或接受風(fēng)險(xiǎn)的決定,1）風(fēng)險(xiǎn)是否在可接受的水平 以上？2）怎么才能降低、控制或消 除風(fēng)險(xiǎn)3）在利益、

55、風(fēng)險(xiǎn)和資源間合 適的平衡點(diǎn)是什么？4）作為鑒定風(fēng)險(xiǎn)控制結(jié)果而 被引入的新的風(fēng)險(xiǎn)是否處 于受控狀態(tài),風(fēng)險(xiǎn)通報(bào),風(fēng)險(xiǎn)回顧,決策制訂人及其他人員之間交換或分享風(fēng)險(xiǎn)及其管理信息,風(fēng)險(xiǎn)管理的過程結(jié)果應(yīng)結(jié)合新的知識與經(jīng)驗(yàn)進(jìn)行回顧,,風(fēng)險(xiǎn)評估,,風(fēng)險(xiǎn)評估,,,,,,,質(zhì)量風(fēng)險(xiǎn)的評估,風(fēng)險(xiǎn)評估是基于對危害發(fā)生的頻次和危害程度這兩方面考慮而得出的綜合結(jié)論，評估結(jié)果需被量化。,發(fā)生的可能第1級:稀少(發(fā)生頻次小于每十年一次)第2級:

56、不太可能發(fā)生(每十年一次)第3級:可能發(fā)生(每五年一次)第4級:很可能發(fā)生(每一年一次)第5級:經(jīng)常發(fā)生(幾乎每次都可能發(fā)生),嚴(yán)重程度第1級:可忽略第2級:微小第3級:中等第4級:嚴(yán)重第5級:毀滅性,風(fēng)險(xiǎn)指示值=危害嚴(yán)重性指數(shù)值×危害發(fā)生頻次指數(shù)值,質(zhì)量風(fēng)險(xiǎn)的評估,低風(fēng)險(xiǎn)：1－5 中等風(fēng)險(xiǎn)：5－9 高風(fēng)險(xiǎn)： 10－25,主要的風(fēng)險(xiǎn)管理工具,基本的風(fēng)險(xiǎn)管理的簡明方法：　流程圖、檢查表、過程圖、因果分

57、析圖失效模式與影響分析（FMEA）失敗模式，影響和關(guān)鍵點(diǎn)分析（FMECA）過失樹枝分析（FTA）危害源分析和關(guān)鍵控制點(diǎn)（HACCP）危害源可操作性分析（HAZOP）初步危害源分析（PHA）風(fēng)險(xiǎn)評級和過濾支持性統(tǒng)計(jì)學(xué)分析工具,注射劑生產(chǎn)的風(fēng)險(xiǎn)分析,內(nèi)源性的影響因素凈化空調(diào)系統(tǒng)設(shè)備工藝過程物料和中間體的質(zhì)量外源性的影響因素人員,示例1：原材料和內(nèi)包裝材料的風(fēng)險(xiǎn)評估,潛在風(fēng)險(xiǎn)　　　微生物質(zhì)量缺陷后果　　　

58、可導(dǎo)致產(chǎn)品滅菌前微生物含量失控產(chǎn)生風(fēng)險(xiǎn)的原因　　　供應(yīng)商質(zhì)量保證不完善、注射用水系統(tǒng)設(shè)計(jì)或管理不完善,示例1：原材料和內(nèi)包裝材料的風(fēng)險(xiǎn)評估,管理措施采購標(biāo)準(zhǔn)控制原輔料微生物限度供應(yīng)商均按SOP規(guī)定經(jīng)過嚴(yán)格篩選每批檢查微生物含量，嚴(yán)格管理倉儲條件輸液瓶定點(diǎn)采購，熱塑封裝，防止淋濕和昆蟲 污染注射用水80℃以上高速循環(huán)按照SOP對總回水口每日取樣，對其它使用點(diǎn) 每周循環(huán)檢驗(yàn)微生物和內(nèi)毒素風(fēng)險(xiǎn)水平 年

59、度質(zhì)量回顧證明質(zhì)量穩(wěn)定，可以接受。,示例2：滅菌前各工序風(fēng)險(xiǎn)評估,潛在風(fēng)險(xiǎn)：滅菌前微生物失控􀂄后果：超出已驗(yàn)證滅菌工藝的范圍，導(dǎo)致滅菌不徹底􀂄原因設(shè)備、包裝容器清潔、消毒不當(dāng)生產(chǎn)環(huán)境和操作人員引入工藝和關(guān)鍵設(shè)備偏差殘留微生物在適宜的條件下繁殖,示例2：滅菌前各工序風(fēng)險(xiǎn)評估,管理措施（設(shè)備清潔）計(jì)算機(jī)管理設(shè)備的狀態(tài)經(jīng)驗(yàn)證的CIP和SIP程序由計(jì)算機(jī)控制關(guān)鍵參數(shù)：水溫，清潔劑

60、濃度，流速，時(shí)間，閥門的開閉，蒸汽溫度，壓力等SOP詳細(xì)規(guī)定各種生產(chǎn)計(jì)劃模式下CIP、SIP的周期與有效期,示例2：滅菌前各工序風(fēng)險(xiǎn)評估,管理措施（消除生產(chǎn)環(huán)境和人員造成的污染）符合歐盟動態(tài)標(biāo)準(zhǔn)的潔凈區(qū)A級下連續(xù)微粒監(jiān)測，C級區(qū)每周監(jiān)測HVAC系統(tǒng)由計(jì)算機(jī)控制的恒風(fēng)量送風(fēng)每年2次DOP測試計(jì)算機(jī)自動配液與灌裝，最大限度減少人員接 觸原料的機(jī)會,示例2：滅菌前各工序風(fēng)險(xiǎn)評估,管理措施（工藝和關(guān)鍵設(shè)備偏差）

61、控制各步驟的時(shí)限選用國際著名廠商的藥液過濾器，使用前后完整性測試，使用周期經(jīng)過驗(yàn)證發(fā)生偏差后增補(bǔ)滅菌前微生物含量樣品SOP明確規(guī)定了發(fā)生諸如停電、通風(fēng)系統(tǒng)故障、環(huán)境衛(wèi)生狀況超標(biāo)等偏差后應(yīng)采取的相應(yīng)措施。洗瓶設(shè)備經(jīng)清洗效果和微生物殘留驗(yàn)證。設(shè)置了洗瓶水過濾器壓差和水壓低限保護(hù)傳感器。,示例2：滅菌前各工序風(fēng)險(xiǎn)評估,管理措施（監(jiān)控）制定滅菌前微生物含量警戒、糾偏、合格標(biāo)準(zhǔn)SOP保證滅菌前微生物含量樣品的代表性樣品