麻痹性貝毒在牡蠣體內蓄積、分布、轉化以及羧甲基殼聚糖的脫除作用研究.pdf

1、麻痹性貝類毒素(PSP)是一種能夠與神經(jīng)細胞膜結合，影響和阻止Na+向細胞內流動，從而無法形成正常的動作電位，進而抑制神經(jīng)傳導，導致神經(jīng)性麻痹中的神經(jīng)性毒素。PSP主要產(chǎn)自海洋中的單細胞甲藻，是目前已知海洋有害赤潮藻毒素中引發(fā)毒害事件最頻繁、對人類影響最嚴重的一種毒素。濾食性貝類是近海岸主要的大型底棲動物，它們能過濾大量海水并富集有毒藻中的毒素，通過食物鏈傳遞給人類，每年都有誤食受PSP污染的貝類中毒事件報道。隨著有害赤潮以及PSP中毒

2、事件頻繁發(fā)生，麻痹性貝類毒素污染已成為世界關注的焦點。
　　本文通過實驗室培養(yǎng)產(chǎn)毒微小亞歷山大藻(A.minutum)，對我國沿海地帶養(yǎng)殖的主要經(jīng)濟貝類——近江牡蠣進行人工染毒實驗；以小鼠生物法、熒光法、HPLC-FLD法等作為檢測手段，研究 PSP在牡蠣體內的蓄積、分布、排出以及轉化規(guī)律，重點考查羧甲基殼聚糖對牡蠣體內PSP脫除效果，對其脫除機理進行初步探索。主要結果如下：
　　(1)采用不同初始密度(0.05×104、0

3、.1×104、0.15×104、0.3×104cells/mL)以及不同培養(yǎng)方式（培養(yǎng)箱、室外）培養(yǎng)微小亞歷山大藻，研究微小亞歷山大藻生長以及產(chǎn)毒規(guī)律。結果表明：隨著初始密度增加藻細胞通過靜止期時間縮短，到達最大生長密度時間提前；培養(yǎng)箱和室外培養(yǎng)方式下微小亞歷山大藻都可以正常生長，而且毒素組成相同，都含有 GTX1/2/3/4，但是毒素相對含量存在差異，培養(yǎng)箱錐形瓶培養(yǎng)的藻細胞毒素含量為25.28 fmol/cell低于室外廣口瓶(30

4、.60fmol/cell)。綜合考慮微小亞歷山大藻的生長周期、最大生長密度以及產(chǎn)毒能力，在室外廣口瓶中接種密度為0.1~0.15×104 cells/mL微小亞歷山大藻能夠達到較好的產(chǎn)毒效果，從而滿足毒素提取和投喂牡蠣的實驗需要。
　　(2)以不同密度(0.5~3×103 cells/mL)微小亞歷山大藻短期投喂牡蠣，獲得牡蠣最佳濾食濃度為0.5~1.5×103cells/mL，在此基礎上每天投喂兩次微小亞歷山大藻，共進行5天毒素

5、蓄積實驗，研究牡蠣對PSP的蓄積、分布以及轉化規(guī)律，結果表明：長期投喂微小亞歷山大藻過程中，有毒藻對牡蠣濾食能力沒有顯著影響，這導致牡蠣在短期內蓄積大量毒素，在毒素蓄積的最后一天牡蠣體內毒性水平達3069.2±178.2MU/100g，高于國家限量標準(400MU/100g)的7.7倍；毒素在牡蠣體內的分布具有組織差異性，內臟是蓄積PSP的主要部位，蓄積了87％的毒素，其次是外套膜+鰓(11%)，肌肉中蓄積的毒素最少(2%)；牡蠣體內P

6、SP組成與產(chǎn)毒微小亞歷山大藻毒素組成存在差異，PSP在牡蠣體內主要發(fā)生GTX2→dcGTX2轉化。
　　(3)采用扁藻混合羧甲基殼聚糖、扁藻、饑餓三種凈化方式對牡蠣進行PSP脫除實驗，研究脫毒過程中牡蠣內臟、外套膜+鰓以及肌肉中PSP排出以及轉化規(guī)律，結果表明：牡蠣所有組織中的PSP都隨著凈化時間的延長逐漸減少，內臟中毒素排出速率最快，最大排出速率為0.26d-1，肌肉中毒素排出速率最慢(0.06d-1)；與饑餓喂養(yǎng)方式相比添加羧

7、甲基殼聚糖可以提高牡蠣各個組織中毒素排出速率；毒素主要以GTX1/4形式排出體外，添加羧甲基殼聚糖可以有效降低牡蠣中STX含量，PSP在排出過程發(fā)生了生物轉化，主要表現(xiàn)為 GTX1/4→GTX2/3、GTX2/3→STX、GTX2→dcGTX2。
　　(4)采用pH為7.2的磷酸鹽緩沖液能夠有效提取牡蠣中可溶性各組分PSP，其中牡蠣內臟和外套膜+鰓中PSP主要以小分子(0~3500Da)形式存在，而肌肉中毒素主要以大分子形(>35