利迪鏈霉菌對外源谷氨酸和脯氨酸的代謝響應(yīng)研究.pdf

1、外源谷氨酸和脯氨酸的添加極大地促進(jìn)了利迪鏈霉菌E9發(fā)酵中利迪鏈菌素的產(chǎn)量。本文通過考察外源氨基酸對利迪鏈霉菌代謝組和蛋白質(zhì)組帶來的擾動(dòng),揭示了谷氨酸和脯氨酸促進(jìn)利迪鏈菌素生產(chǎn)的機(jī)制,同時(shí)本文還對利迪鏈霉菌所產(chǎn)的抗真菌活性物質(zhì)做了初步的定性研究。主要研究結(jié)果為:
　　1)利迪鏈霉菌發(fā)酵過程中,外源谷氨酸(100mg/L)和脯氨酸(100mg/L)的添加分別提高了56.8％和49.5%的利迪鏈菌素產(chǎn)量。通過GC-TOF MS對利迪鏈霉

2、菌添加外源氨基酸后不同發(fā)酵時(shí)期(12h,24h,72h)的胞內(nèi)代謝物進(jìn)行分析,總共對53種差異表達(dá)代謝物進(jìn)行了定性定量考察。通過PCA分析發(fā)現(xiàn)影響利迪鏈菌素產(chǎn)量的7種潛在生物標(biāo)志物有:纈氨酸,甘氨酸,丙氨酸,葡萄糖,正十六酸,硬脂酸,cAMP。
　　2)利用二維色譜結(jié)合飛行時(shí)間質(zhì)譜(2D-LC-MS/MS)及同位素標(biāo)記相對定量技術(shù)(iTRAQ)對添加谷氨酸和脯氨酸的利迪鏈霉菌發(fā)酵12h的胞內(nèi)蛋白進(jìn)行定量分析,共檢測到318種蛋白質(zhì)

3、,對其中98種蛋白進(jìn)行了定量分析。發(fā)現(xiàn)外源谷氨酸和脯氨酸的添加會(huì)導(dǎo)致蛋白水平顯著下降,尤其是谷氨酸的添加。這些差異表達(dá)的蛋白主要是參與核糖體結(jié)構(gòu)蛋白、翻譯蛋白以及與利迪鏈菌素合成相關(guān)的氨基酸代謝和碳代謝相關(guān)的蛋白。
　　3)通過對利迪鏈霉菌所產(chǎn)的抗真菌活性物質(zhì)的定性分析,發(fā)現(xiàn)此類活性物具有分解β-1,3葡聚糖的功能,同時(shí)通過簡單的濃縮離心步驟得到了該活性物質(zhì)的初步分離產(chǎn)物,運(yùn)用SDS-PAGE電泳分析初步確定其分子量約為2500D