3種致病性弧菌選擇性鑒別培養(yǎng)基的研制.pdf

1、水產(chǎn)品是人類賴以生存的基礎(chǔ)物質(zhì)和重要蛋白來(lái)源,深得消費(fèi)者的喜愛(ài),消費(fèi)量也在日益提高。致病性弧菌是水產(chǎn)品中引發(fā)人體疾病的主要致病菌,會(huì)引發(fā)人的季節(jié)性傳播流行性的腸道疾病,導(dǎo)致人類發(fā)生嚴(yán)重的腹瀉等消化道疾病或創(chuàng)傷感染病變、創(chuàng)傷感染或發(fā)生敗血癥,甚至死亡。研究和建立致病性弧菌快速檢測(cè)的新技術(shù)和新方法受到各國(guó)研究機(jī)構(gòu)的重視。用選擇性鑒別培養(yǎng)基即可滿足抽檢率,更真實(shí)的反應(yīng)水產(chǎn)品的污染狀況,又能克服標(biāo)準(zhǔn)方法的費(fèi)時(shí)、繁瑣和成本較高等許多不足。

2、　　 本論文主要圍繞以下幾個(gè)方面開(kāi)展了一些工作:
　　 1霍利斯弧菌選擇性鑒別培養(yǎng)基的研制基于霍利斯弧菌的基礎(chǔ)營(yíng)養(yǎng)和特殊生態(tài)環(huán)境需求,優(yōu)化了其增菌培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件。通過(guò)單因素試驗(yàn)結(jié)合響應(yīng)面組合試驗(yàn)得到如下結(jié)果:培養(yǎng)基組成成分為混合蛋白胨2.11％(胰蛋白胨:魚(yú)蛋白胨為1:1)、酵母浸膏0.210％、NaCl2.13％、pH7.5;培養(yǎng)溫度為36±1℃。經(jīng)過(guò)8h增菌后,該培養(yǎng)基的菌液濃度是GB/T4789.7-2008中規(guī)定方法

3、的堿性蛋白胨水(APW)增菌菌液濃度的1.39倍,增菌效果明顯。
　　 以霍利斯弧菌特有的酶系統(tǒng)及其代謝特點(diǎn)和對(duì)某些特定抑菌成分的抵抗力為基礎(chǔ),設(shè)計(jì)研制了霍利斯弧菌選擇性鑒別培養(yǎng)基(VhDM)。試驗(yàn)中對(duì)VhDM的顯色效果、平板效率、靈敏度和特異性進(jìn)行評(píng)價(jià)。結(jié)果顯示:VhDM對(duì)霍利斯弧菌具有較好的選擇性和特異性;用VhDM在36±1℃培養(yǎng)16 h～24 h,霍利斯弧菌菌落為黃色;其它各種弧菌及非弧菌屬致病菌菌落呈紅色或未形成有效的

4、可見(jiàn)菌落;VhDM對(duì)霍利斯弧菌的出菌效率與嗜鹽瓊脂相比為(90.65±1.72)％;檢出限為101 cfu/mL;因此,VhDM對(duì)海產(chǎn)品中霍利斯弧菌分離鑒別與檢測(cè)是可行的,且具有操作簡(jiǎn)便、經(jīng)濟(jì)、結(jié)果易于觀察等優(yōu)點(diǎn)。
　　 2河弧菌選擇性鑒別培養(yǎng)基的研制基于河弧菌的基礎(chǔ)營(yíng)養(yǎng)和特殊生態(tài)環(huán)境需求,優(yōu)化了其增菌培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件。通過(guò)單因素試驗(yàn)結(jié)合響應(yīng)面組合試驗(yàn)得到如下結(jié)果:培養(yǎng)基組成成分為混合蛋白胨2.24％(胰蛋白胨:魚(yú)蛋白胨為1:3

5、)、酵母浸膏0.204％、NaCl1.81％、pH8.0;培養(yǎng)溫度為36±1℃。經(jīng)過(guò)8h增菌后,該培養(yǎng)基的菌液濃度是GB/T4789.7-2008中規(guī)定方法的堿性蛋白胨水(APW)增菌菌液濃度的1.59倍,增菌效果明顯。
　　 以河弧菌特有的酶系統(tǒng)及其代謝特點(diǎn)和對(duì)某些特定抑菌成分的抵抗力為基礎(chǔ),設(shè)計(jì)研制了河弧菌選擇性鑒別培養(yǎng)基(VfDM)。試驗(yàn)中對(duì)VfDM的顯色效果、平板效率、靈敏度和特異性進(jìn)行評(píng)價(jià)。結(jié)果顯示:VfDM對(duì)河弧菌具

6、有較好的選擇性和特異性;用VfDM在36±1℃培養(yǎng)18 h～24 h,河弧菌菌落為深褐色;其它各種弧菌及非弧菌屬致病菌菌落呈紅色或未形成有效的可見(jiàn)菌落;VfDM對(duì)河弧菌的出菌效率與嗜鹽瓊脂相比為(92.80±2.88)％;檢出限為101 cfu/mL;因此,VfDM對(duì)海產(chǎn)品中河弧菌分離鑒別與檢測(cè)是可行的,且具有操作簡(jiǎn)便、經(jīng)濟(jì)、結(jié)果易于觀察等優(yōu)點(diǎn)。
　　 3弗尼斯弧菌選擇性鑒別培養(yǎng)基的研制基于弗尼斯弧菌的基礎(chǔ)營(yíng)養(yǎng)和特殊生態(tài)環(huán)境需求

7、,優(yōu)化了其增菌培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件。通過(guò)單因素試驗(yàn)結(jié)合響應(yīng)面組合試驗(yàn)得到如下結(jié)果:培養(yǎng)基組成成分為混合蛋白胨2.08％(胰蛋白胨:魚(yú)蛋白胨為1:3)、酵母浸膏0.221％、NaCl1.94％、pH8.5;培養(yǎng)溫度為36±1℃。經(jīng)過(guò)8h增菌后,該培養(yǎng)基的菌液濃度是GB/T4789.7-2008中規(guī)定方法的堿性蛋白胨水(APW)增菌菌液濃度的1.48倍,增菌效果明顯。
　　 以弗尼斯弧菌特有的酶系統(tǒng)及其代謝特點(diǎn)和對(duì)某些特定抑菌成分的抵抗

8、力為基礎(chǔ),設(shè)計(jì)研制了弗尼斯弧菌選擇性鑒別培養(yǎng)基(VfuDM)。試驗(yàn)中對(duì)VfuDM的顯色效果、平板效率、靈敏度和特異性進(jìn)行評(píng)價(jià)。結(jié)果顯示:VfuDM對(duì)弗尼斯弧菌具有較好的選擇性和特異性;用VhDM在36±1℃培養(yǎng)18 h～24 h,弗尼斯弧菌菌落為黃色;其它各種弧菌及非弧菌屬致病菌菌落呈藍(lán)色或未形成有效的可見(jiàn)菌落;VfuDM對(duì)弗尼斯弧菌的出菌效率與嗜鹽瓊脂相比為(92.98±2.58)％;檢出限為101cfu/mL;因此,VfuDM對(duì)海產(chǎn)

9、品中弗尼斯弧菌分離鑒別與檢測(cè)是可行的,且具有操作簡(jiǎn)便、經(jīng)濟(jì)、結(jié)果易于觀察等優(yōu)點(diǎn)。
　　 通過(guò)增菌培養(yǎng)基與選擇性鑒別培養(yǎng)基結(jié)合檢測(cè)3種致病性弧菌的方法,與常規(guī)方法(TCBS結(jié)合法國(guó)梅里埃細(xì)菌鑒定系統(tǒng)API20E試劑條或弧菌科生化鑒定管)相比,提高了目的菌的檢出率,檢測(cè)結(jié)果直觀,易于觀察,靈敏度高、特異性強(qiáng),且降低檢測(cè)成本,操作簡(jiǎn)便,減少工作量,具有更高的檢測(cè)效率和鑒別能力,為構(gòu)建同時(shí)快速篩檢12種致病性弧菌的增菌和選擇性鑒別培養(yǎng)基