一種檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)RNA轉(zhuǎn)錄的熒光探針前體的合成研究.pdf

1、熒光探針技術(shù),由于其檢測(cè)方法的多樣性、靈敏度高、直觀性強(qiáng)、檢測(cè)速度快等諸多優(yōu)越性的存在,已得到了廣泛的應(yīng)用。尤其近年來,隨著生物技術(shù)的發(fā)展,熒光探針技術(shù)已經(jīng)在蛋白質(zhì)、核酸、細(xì)胞檢測(cè)等方面發(fā)揮著越來越大作用。
　　 本課題設(shè)計(jì)合成了一種基于Click反應(yīng)基礎(chǔ)上測(cè)定細(xì)胞內(nèi)RNA轉(zhuǎn)錄的熒光探針。首先分別合成兩個(gè)前熒光物質(zhì),5-乙炔基尿苷(EU)和3-疊氮基香豆素,然后用前述5-乙炔基尿苷來標(biāo)記體內(nèi)RNA(EU-RNA)。當(dāng)用于RNA轉(zhuǎn)

2、錄檢測(cè)時(shí),3-疊氮基香豆素通過一價(jià)銅催化的1,3環(huán)加成反應(yīng)來檢測(cè)EU標(biāo)記的RNA(EU-RNA),在熒光顯微鏡下觀察RNA的轉(zhuǎn)錄情況,從而說明RNA的表達(dá)是否異常。
　　 實(shí)驗(yàn)中以尿苷、醋酐、IC1和三甲基硅基乙炔為原料通過酯化、氯代、sonogashira偶聯(lián)、酯醇解等反應(yīng)合成了5-乙炔基尿苷(EU),產(chǎn)率達(dá)到65％;以水楊醛、N-乙酰基甘氨酸和疊氮化鈉為原料通過Schiff堿水解、重氮化和疊氮化反應(yīng)合成了3-疊氮基香豆素,產(chǎn)